第二节分离特定的微生物并测定其数量1．掌握涂抹平板法或混合平板法。2．掌握利用选择培养基分离特定微生物的方法。3．观察各种微生物形成的菌落。微生物种类多样，也有多种代谢类型。尿素是一种重要的农业氮肥，人类和其他哺乳动物的尿中都含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。既然微生物有多种代谢类型，那么有没有能降解尿素的微生物呢？今天我们就试试能不能从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物。1、实例：DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶。要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；方法：⑴抑制大多数微生物不能生长；⑵造成有利于该菌生长的环境。结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。1、显微镜直接计数：2、间接计数法（活菌计数法）⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。⑵常用方法：稀释涂布平板法。计数法1、哪些土壤中含有这种以尿素为氮源微生物多？5、用稀释涂布平板法计数时，菌落数在30-300（20以内）计数。从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。1个50ml无菌水2个4.5ml无菌水制备选择培养基（尿素为唯一氮源）制备牛肉膏蛋白胨培养基◆应在火焰旁称取土壤10g。◆在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在火焰旁进行为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。取0.1ml菌悬液高浓度→低浓度，换枪头涂布分离在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。按浓度捆成一摞菌落微生物计数方法活菌计数——样品稀释度足够高时，培养基表面只生长1个菌落（来源于样品稀释液中的1个活菌）。根据平板上菌落数，推测样品中大约含有多少活菌。结果一般用菌落数而不是活菌数表示。显微观察计数——红细胞计数板，观察数量，再根据浓度比例计算出菌体数量。1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）A.在液体培养基上进行B.至少接种一种细菌C.接种一个细菌D.及时补充消耗的营养物质2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素3.下列说法不正确的是（）A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。