厚荚相思转基因受体系统建立及遗传转化初步研究的中期报告.docx
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厚荚相思转基因受体系统建立及遗传转化初步研究的中期报告本研究是针对厚荚相思挥发性成分的遗传转化进行了初步的探索。研究分为两个阶段:建立厚荚相思转基因受体系统和进行遗传转化实验。一、建立转基因受体系统1.1筛选适宜的受体基因在厚荚相思的挥发性成分合成途径中,一个关键的酶为S-腺苷基-L-甲硫氨酸合成酶(SAM合成酶),因此我们选取了该基因作为受体基因进行进一步实验。1.2构建过表达表达载体通过PCR扩增出SAM合成酶的全长序列,与pCAMBIA1301载体连接,构建SAM合成酶过表达载体pCAMBIA1301-SAM。1.3转化厚荚相思细胞将pCAMBIA1301-SAM载体引入厚荚相思细胞中,得到转化细胞,为下一步遗传转化实验做准备。二、遗传转化实验2.1优化遗传转化条件对不同的厚荚相思组织进行亚麻酸处理和冷冻处理,以寻找最适宜的遗传转化条件。2.2构建遗传转化载体并转化厚荚相思细胞选取pCAMBIA1301-SAM载体,将该载体转化进入优化后的厚荚相思细胞体内,并进行筛选。2.3鉴定转基因植株对转化后的植物进行PCR和Southern印迹,判断SAM合成酶基因是否成功整合到植物基因组中。目前,我们已经完成了厚荚相思转基因受体系统建立和遗传转化优化条件的探索,初步得到了一批转化植株,并展开了进一步的遗传稳定性鉴定工作。期待本研究可以为厚荚相思挥发性成分的合成及药用价值的开发提供一定的实验基础和理论支持。
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