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血红蛋白的提取和分离血液组成成分和血红蛋白蛋白质提取和分离的原理:原理:根据相对分子质量的大小2、电泳法:在一定pH下,使蛋白质基团带上正电或负电;加入带负电荷多的SDS,形成“蛋白质-SDS复合物”,使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。如H2CO3/NaHCO3,醋酸/醋酸钠,NaH2PO4/Na2HPO4等实验操作(一)样品处理1.洗涤红细胞2.释放血红蛋白破裂红细胞混合液甲苯层(无色透明)4.透析(粗分离)(二)、纯化--凝胶色谱法3.样品的加入和洗脱样品加入与洗脱3.样品加入与洗脱(三)、蛋白质纯度鉴定观察处理的血液样品离心后是否分层(见教科书图5-18),如果分层不明显,可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外,离心速度过高和时间过长,会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,也得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度。实验结果分析与评价如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话,能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整,随着洗脱液缓慢流出;如果红色区带歪曲、散乱、变宽,说明分离的效果不好,这与凝胶色谱柱的装填有关。