不结球白菜种质资源抗TuMV鉴定评价及eIF(iso)4E基因克隆和序列分析中期报告本研究旨在对不结球白菜种质资源抗番茄花叶病毒（TuMV）进行鉴定评价，并对其eIF（iso）4E基因进行克隆和序列分析。中期报告如下：第一部分：不结球白菜种质资源抗TuMV鉴定评价1.实验材料共选取了10个不结球白菜种质资源，包括“大头菜”、“精华菜”、“毛心菜”、“英文白菜”等。2.实验方法采用接种法对不结球白菜进行抗TuMV鉴定评价，具体操作如下：将病毒侵染过的西兰花叶片加入液氮中磨碎后，加入碎冰水中，离心后收集上清液。将约2周龄的不结球白菜全部接入该病毒上清液中，并分别在25℃和16℃的条件下、薄膜覆盖的密闭温室中进行实验。处理4天后，对不结球白菜进行鉴定评价。3.实验结果经实验测定，共有6个不结球白菜表现出了抗TuMV的能力，包括“鸡心菜”、“水曲白菜”等。第二部分：eIF（iso）4E基因克隆和序列分析1.实验材料选取了抗TuMV的“鸡心菜”作为材料。2.实验方法（1）提取总RNA并进行cDNA合成：采用Trizol法提取“鸡心菜”总RNA，使用PrimeScriptRTMasterMix（Takara，日本）进行cDNA合成。（2）eIF（iso）4E基因克隆：根据NCBI中的eIF（iso）4E基因序列设计引物并进行PCR扩增，将扩增产物进行纯化，并进行测序。（3）序列分析：使用BioEdit软件对测序结果进行编辑和比对，并使用MEGA7软件进行基于邻接法的系统进化分析。3.实验结果（1）成功克隆了“鸡心菜”中的eIF（iso）4E基因。（2）序列分析结果显示，该基因长度为1014bp，编码序列长954bp，推测该基因对应蛋白分子量为31.6kDa。序列比对结果表明，该基因与石榴、拟南芥等植物物种中的eIF（iso）4E基因序列具有高度同源性。综上，本研究初步对不结球白菜种质资源抗TuMV进行了鉴定评价，并成功克隆和分析了其中一份抗TuMV“鸡心菜”中的eIF（iso）4E基因序列。接下来将进一步进行基因功能鉴定和表达分析。