刺参抗菌肽的分离纯化及活性检测的中期报告一、分离纯化1.1获取刺参从市场购买新鲜刺参，取出刺后用水清洗干净后晾干备用。1.2提取刺参抗菌肽将晾干后的刺参粉末加入无菌蒸馏水中，与其混合均匀后，在常温下静置4-6小时，使其充分吸收水分。然后将混合液通过滤纸过滤，拿出滤液即为提取的刺参抗菌肽。1.3溶剂萃取将滤液倒入烧杯中，逐步加入95%的酒精。在搅拌后，将混合液置于常温下，让其沉淀约2小时。将上清液取出，再次加入无菌蒸馏水，重复此过程。最后将所有上清液混合，使用旋转蒸发仪将液体浓缩。将其溶于合适体积的无菌蒸馏水中，即为刺参抗菌肽的提取液。1.4KF-C18柱层析将刺参抗菌肽提取液加入50%乙腈，与其混合均匀后通过KF-C18柱进行层析。使用四倍体积的80%乙腈对进行洗脱，采用无菌蒸馏水进行淋洗，用四倍体积的乙腈洗脱纯化蛋白。用低温旋转真空干燥器将洗脱液干燥后即为刺参抗菌肽的纯化制品。二、活性检测2.1抗菌活性检测采用两种方法对刺参抗菌肽的抗菌活性进行检测。(1)纸片散发试验：将不同浓度的刺参抗菌肽加入琼脂平板，进行纸片散发试验。分别向不同的孔中加入20μl的提取液，放置在室温下培养约18-24小时。观察周围的细菌生长情况，判断抗菌活性。(2)圆片扩散试验：将不同浓度的刺参抗菌肽加入琼脂平板中，运用圆片扩散法评估其抗菌活性。将含有细菌的琼脂平板与含有抗菌肽的凸起圆片放置在同一平板上。通过测量细胞死亡区域的大小，评估刺参抗菌肽的抗菌活性。2.2抗氧化活性检测采用两种方法对刺参抗菌肽的抗氧化活性进行检测。(1)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除能力：通过对刺参抗菌肽样品与DPPH稳定自由基的反应，测定其抗氧化活性。(2)过氧化氢清除能力：通过对刺参抗菌肽样品与不同过氧化氢质量浓度的反应，在不同时间内测量其过氧化氢清除能力。以上就是本次的中期报告，感谢您的阅读。