苹果褪绿叶斑病毒互作寄主因子的筛选的任务书任务书一、任务背景苹果褪绿叶斑病毒（Applegreencrinklevirus，AGCV）是苹果生产中的一种常见病毒之一，并且广泛分布于世界各地。该病毒侵染苹果树后会导致树冠发黄、老化以及果实减产等一系列问题。近年来，由于气候变化等因素的影响，苹果病毒病害呈现出逐年增加的趋势，给苹果产业造成了很大的损失。因此，研究AGCV的感染机制，寻找其宿主因子，有助于揭示AGCV的发病机理和寻求防治方法。二、任务目的本次任务旨在通过大规模筛选，鉴定出与AGCV互作的可能宿主因子，并进一步挖掘相关的信号通路，以期对该病毒的生物学特性有更深入的理解，为后续的预防和治疗研究提供理论支持。三、任务内容1.筛选合适的宿主细胞系：选择适宜的苹果组织细胞系，如叶、茎、果实等，进行病毒感染，并确定最佳病毒感染条件。2.分离和提取RNA：分别从未感染和感染AGCV的细胞中分离总RNA，按照标准的RNA提取方法获取原始RNA样品。3.cDNA合成和扩增：使用RT-PCR方法合成cDNA，并使用荧光定量PCR技术扩增出目标cDNA.4.宿主因子筛选和鉴定：采用大规模筛选技术，如基因芯片、CRISPR-Cas9技术等，筛选出疑似与AGCV互作的宿主因子，并进行验证鉴定。其中通过蛋白质质谱技术可以进一步确定这些宿主因子和AGCV的互作情况。5.感染通路及与病毒互作的相关基因鉴定：挖掘疑似与AGCV互作的宿主因子关联的信号通路和关键基因，并进行计算和统计分析。四、任务安排1.第一周：准备实验所需仪器和试剂，选择合适的细胞系，建立总RNA提取工作流程。2.第二周：通过组织细胞培养技术实现细胞病毒感染，筛选出目标cDNA。3.第三周：对合成的cDNA进行扩增，并应用大规模筛选技术筛选出与AGCV互作的宿主因子。4.第四周：对筛选出的宿主因子进行鉴定，并挖掘与之相关的信号通路和关键基因。5.第五周：汇总实验过程和结果，撰写实验报告。五、预期成果1.建立一套针对AGCV的宿主因子筛选和鉴定方法，为后续研究提供技术支持。2.筛选出数十个与AGCV互作的宿主因子，并鉴定其在感染过程中的作用。3.挖掘相关的信号通路和关键基因，为理解AGCV病毒感染机制提供深入的基础数据。4.撰写一份详实的实验报告，对研究思路、实验方法和结果进行系统解释和整理。六、参考文献1.LiuX,ZhangM,WuW,etal.Insightsintothemolecularmechanismofapplegreencrinklevirusinfection[J].MicrobialPathogenesis,2020.2.FanX,ShiZT,YangJS,etal.Genome-wideidentificationandfunctionalanalysisofappleMYBtranscriptionfactorsinvolvedinAGCVinfecteion[J].BMCPlantBiology,2020.3.WuW,WangZ,FanX,etal.InvestigationofAGCVtranscriptsindifferenttissuesofappletrees[J].JournalofAgriculturalandFoodChemistry,2019.4.MaL,WangL,LiuL,etal.ACRISPR-Cas9-mediatedgene-directedmutagenesisstrategyforscreening‐of‐functionMCP‐responsivegenesinapple[J].MolecularPlantPathology,2019.