抗肝癌单链抗体的体外亲和力成熟研究的开题报告摘要肝癌是一种高发病和高死亡率的癌症，目前尚无完全治愈的方法。因此，发展肝癌治疗的新方法至关重要。单链抗体是一种新型的抗体分子，具有良好的组织渗透性、细胞性和结构特点。因此，开发针对肝癌的单链抗体具有重要的临床应用前景。本文提出研究抗肝癌单链抗体体外亲和力的成熟研究。研究将从构建原核表达载体、转化大肠杆菌、纯化单链抗体等方面展开，并利用表面等离子共振技术分析抗体与靶标的亲和力。该研究可为开发肝癌治疗新药和评估其疗效提供参考。关键词：单链抗体；肝癌；体外亲和力；表面等离子共振技术AbstractLivercancerisahighlyprevalentandfatalcancer,andthereiscurrentlynocompletelycurativemethodavailable.Therefore,developingnewapproachesforthetreatmentoflivercanceriscrucial.Single-chainantibodiesareanewtypeofantibodymoleculewithgoodtissuepenetration,cellularity,andstructuralcharacteristics.Therefore,developingsingle-chainantibodiestargetinglivercancerhasimportantclinicalapplicationprospects.Thisstudyproposesamaturestudyoftheinvitroaffinityofanti-livercancersingle-chainantibodies.Thestudywillbecarriedoutfromtheaspectsofconstructingaprokaryoticexpressionvector,transformingEscherichiacoli,purifyingsingle-chainantibodies,etc.,andusingsurfaceplasmonresonancetechnologytoanalyzetheaffinitybetweenantibodiesandtargets.Thisstudycanprovideareferencefordevelopingnewdrugsforthetreatmentoflivercancerandevaluatingtheirefficacy.Keywords:single-chainantibody;livercancer;invitroaffinity;surfaceplasmonresonancetechnology1.引言肝癌是一种恶性肿瘤，是全球第五大癌症和第三大癌症死亡原因（Bray等，2018）。尽管有许多治疗肝癌的方法，如手术切除、化疗、放疗和介入治疗，但大多数患者的预后仍然不佳。因此，开发新的肝癌治疗方法是迫切需要的。在遗传工程技术的帮助下，单链抗体(Single-chainantibody,ScFv)成为了一种新兴的抗体分子。与传统的完整抗体相比，ScFv仅包含了重链变量区和轻链变量区的结合部分，形成一个类似Fab片段的结构。ScFv具有良好的组织渗透性、细胞性和结构特点，在肝癌治疗中具有广泛的应用前景（Köhler和Milstein，1975；Rothlisberger等，2005）。在肝癌治疗中，ScFv作为一种新型治疗药物，承担了不可替代的作用。然而，许多已开发的ScFv的疗效并不理想。ScFv的亲和力是ScFv有效性的重要指标之一。因此，研究ScFv的亲和力在开发新的肝癌治疗方法方面具有重要的意义。2.研究目的2.1总体目标本研究旨在开展针对肝癌的单链抗体体外亲和力的成熟研究。通过构建原核表达载体、转化大肠杆菌、纯化单链抗体等步骤，并利用表面等离子共振技术分析抗体与靶标的亲和力，确定适合用于肝癌治疗的单链抗体。2.2具体目标2.2.1构建原核表达载体本研究将从已有的针对肝癌的ScFv序列中选取一个较为有效的ScFv序列。根据该序列设计引物，采用PCR技术扩增ScFv基因。将ScFv基因连接到适当的原核表达载体（如pET28a等）上，构建重组表达载体。2.2.2转化大肠杆菌将构建好的原核表达载体导入大肠杆菌BL21（DE3）中，转化后经筛选获得高表达的SCFV相关菌落。经鉴定确定选取的重组菌株是否满足表达条件。2.2.3纯化单链抗体利用离子交换层析、亲和层析等方法对ScFv进行纯化。经SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定得到的抗体纯度和分子量。2