提纲：􀂇实时荧光定量PCR定义：与普通PCR的区别荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，一般荧光域值的设置是基线（背景）荧光信号的标准偏差的10倍。每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数被称为CT值（thresholdvalue）。定量PCR的数学原理斜率与扩增效率荧光定量PCR化学原理1、SYBRGreen法SYBRGreen熔解曲线分析SYBRGreen法优缺点2、TaqMan探针法TaqMan作用机理TaqMan法优缺点Real-timePCR方法应用•绝对定量(AbsoluteQuantification，AQ)病原体检测转基因食品检测基因表达研究•相对定量(RelativeQuantification，RQ)基因在不同组织中的表达差异药物疗效考核耐药性研究绝对定量与相对定量的定义绝对定量通过标准品定量绝对定量：从荧光到拷贝数相对定量通过内标定量相对定量：参照因子Calibrator相对定量分析方法1-ΔΔCt相对定量分析方法2：双标准曲线法目标基因与内参基因扩增效率不同样品标准品标准品梯度稀释方法复管测试●样品和标准品都要重复●重复次数须遵循统计学要求平台PCR仪介绍Rotorgene6500HRMMJOpticon2谢谢！