第六章动物人工繁殖.ppt
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一、动物人工繁殖包括有性生殖和无性生殖两条途径。前者的关键技术是人工受精与体外受精,后者的关键技术是核移植,两者都涉及胚胎培养与移植。胚胎工程是通过在生殖细胞、胚胎细胞水平上的显微操作技术,来定向控制、改造和创造新遗传性状的技术,是动物细胞工程的拓展和延伸。又称发育工程(revelopmentaltechnology)。二、发展历史及意义发展历史胚胎移植技术是胚胎工程的基础。1891年,英国人希普首次在兔子身上成功的进行了核移植。20世纪30年代,陆续在鼠、兔、羊、猪、牛和马进行胚胎移植实验,相继获得成功。20世纪60年代以来,随着胚胎移植技术的不断成熟和规范化,以及一系列新方法的建立,胚胎工程进展迅速,以日本、澳大利亚和加拿大发展最快。1987年,美国用家猫做代理母亲,移植了一只濒临灭绝的珍贵猫的受精卵,成功获得试管猫。我国自20世纪70年代开始发展该技术,进展也较迅速,但与世界先进国家相比,还存在较大差距。1977年,英国科学家首次创造了世界上第一个试管婴儿。意义1发挥优良母畜的繁殖能力胚胎移植技术是提高母畜繁殖潜力的有效方法,扩大良种雌性配子的推广利用。(超数排卵、同步发情)2促进家畜改良的速度(泌乳高的奶牛、瘦肉型猪、毛肉兼用的细毛羊等)3作为胚胎操作的基础(卵子切割、性别控制、嵌合体制作、细胞核移植、转基因操作等)4保存遗传资源胚胎超低温冷冻技术的运用,给长期保存和运输、异地移植带来方便,还可用于建立“胚胎库”等。三、胚胎工程指从某个体采胚或将试管内的受精卵(8细胞以上或囊胚期)移植到另一个体的输卵管或子宫中去的技术。提供胚胎或受精卵的母畜称为“供体”。接受胚胎或受精卵的母畜称为“受体”,又称“代孕母体”或“代理母亲”。来自供体的胚胎能够在受体的子宫着床,并继续生长和发育,最后产下供体的后代,即是所谓的“借腹怀胎”。1胚胎移植的最佳时期体外培养受精卵发育至8细胞以上的胚胎(囊胚期)时是胚胎移植的最佳时期。早期胚胎发育的三个阶段:1)桑椹胚卵裂球分裂到16-32细胞时,成为一紧密的细胞团,称为桑椹胚。在2-8个细胞时,每个细胞均具有全能性。2)囊胚在胚胎内形成空腔,逐渐变大成为囊胚腔,此时一端细胞个体较大,形成密集(三层)的内细胞团(ICM),将来发育成胚体。另一端只有环透明带一层细胞,称滋养层,将来发育成胚膜。3)原肠胚囊胚进一步发育,内细胞团外的滋养层退化,内细胞团裸出形成胚盘,在胚盘下方衍生出内胚层,此时胚胎称原肠胚。2超数排卵在母畜发情周期的适当时间用人工方法促使其有更多的卵泡发育、成熟、排卵的一项技术。方法是注射促性腺激素,如孕酮、雌二醇、促卵泡激素、促黄体激素、促性腺激素释放激素等。3同步发情指使供体和受体同步发情,即处于相同的生殖周期。4人工受精和胚胎的采集、鉴别超排卵处理的母体在停药后24-48小时开始发情,此时可进行人工受精,以后约在3-7天从母体采集受精卵或胚胎。正常发育的胚胎,其中细胞(卵裂球)外形整齐,大小一致,分布均匀,外膜完整。无卵裂现象(未受精)和异常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。5胚胎移植外科手术法或非手术法胚胎采集:2.非手术法(三)胚胎分割采用显微操作技术,将早期胚胎切割成多份,再移植给受体母畜,达到实现同卵多胎后代的目的。(四)胚胎融合又称胚胎嵌合。将两枚或两枚以上的胚胎(同种或异种)的部分或全部细胞融合在一起,使之发育成一个胚胎,然后移植到受体母畜体内继续发育形成一种嵌合体后代的技术。(五)动物性别控制与胚胎性别鉴定性别控制通过人为干预或操作手段使母畜繁殖所需要的某一性别的后代。性别控制主要用于家畜,可通过两条途径:即X与Y精子的分离技术和胚胎性别鉴定。1)X与Y精子的分离技术包括免疫学分离法和流式细胞分离法。前者是利用Y精子上存在雄性特异性组织相容性抗原(H-Y抗原),利用H-Y抗体进行检测分选。后者是根据X精子和Y精子中DNA含量的差异,在流式细胞仪上分选。2)胚胎性别鉴定指利用细胞生物学或分子生物学的方法识别胚体性状,有效控制动物后代性别比例的技术。细胞生物学方法:通过核型分析对胚体进行性别鉴定分子生物学方法:通过PCR扩增Y染色体上性别决定区的Y基因(SRY)来进行胚体性别鉴定。另外,可以通过激活卵母细胞实现孤雌生殖以及克隆技术实现家畜的性别控制。(六)胚胎冷冻保存技术这是在冷冻细胞的基础上发展起来的,包括精子、卵母细胞和早期胚体的冷冻保存,在此只介绍胚胎的保存。短期临时保存:指将暂时不使用的胚胎在37℃培养液中保存,或在活体同种或异种动物的输卵管内保存1-2天。也可将胚胎置0-4℃低温下保存2-3天。长期冷冻保存:有仪器程序逐步降温冷冻和徒手