当归抗β【摘要】目的研究当归对β-淀粉样蛋白引起的SH-SY5Y神经细胞中尼古丁受体亚单位在蛋白质水平降低、细胞损伤及脂质过氧化的拮抗作用，了解其神经保护作用的可能机制。方法选取一定浓度的当归预处理SH-SY5Y细胞后，再加入β－淀粉样蛋白处理，用比色法测定细胞MTT还原率，从细胞整体水平了解当归对细胞活性的影响；用Westernblotting方法测定神经型尼古丁受体亚单位蛋白表达水平的变化；用TBA比色法测定脂质过氧化产物的水平，以了解当归的抗氧化能力。结果安全浓度的当归提取物能减弱β－淀粉样蛋白引起的细胞损伤和脂质过氧化水平升高，对抗β－淀粉样蛋白引起的α3和α7尼古丁受体亚单位蛋白质水平降低。结论当归有一定的神经保护作用。【关键词】当归；SH-SY5Y细胞；尼古丁受体；β-淀粉样蛋白；脂质过氧化Abstract：ObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectsofAngelicaontheneurotoxicityandthedecreasedexpressionofnAChRsinducedbyb-amyloidpeptide(Ab)inhumanneuroblastoma(SH-SY5Y)cells.MethodsTheSH-SY5Ycellsweretreatedbyacertainconcentrationofangelica,andthenexposedto10mlAβ25-35.MTTreductionassaywascarriedouttodetectthecellviability,lipidperoxidationwasmeasuredbyTBARStoobservethelevelofoxidativestress,andtheexpressionofnicotinicreceptorα3orα7subunitsatproteinlevelwasdetectedbyWesternblot.ResultsAngelicaatasafety-doseinhibitedtheneurotoxicityandtheincreasedlipidperoxidation,andpreventedthedecreasedexpressionofα3andα7nAChRsubunitproteininSH-SY5YcellsinducedbyAβ.ConclusionAngelicacanplayanimportantroleinneuroprotection.Keywords：Angelica;SH-SY5Ycells;nAChR;β-amyloidpepitide;Lipidperoxidation阿尔茨海默氏病是一种以智力缓慢性进行性丧失为特征的神经退变性疾病，是痴呆病中最常见的类型［1］。AD的病因及发病机制至今尚不十分清楚，目前认为AD是由遗传学因素、环境因素和代谢因素等多种因素共同作用所引起的一种疾病，病理学上以脑细胞内神经原纤维缠结及细胞外老年斑形成为主要特征［2］。老年斑的主要成分为β淀粉样蛋白(β-Amyloidprotein,Aβ)，是一种神经毒性物质，可损伤大脑皮层与海马等与记忆相关脑区结构与功能，在AD发病机制中起关键作用。神经型尼古丁乙酰胆碱受体(Nicotinicacetylcholinereceptor,nAChR)与学习和记忆等认知功能密切相关，并具有明显的神经保护作用［3，4］。在较早的一些研究中就发现，AD患者大脑皮层尼古丁受体出现持续的和严重的丢失，大脑皮层的尼古丁受体缺失与AD患者的认知障碍有显着的相关性。当归为伞形科植物当归的干燥根，当归入药，历史悠久，应用广泛，有“十方九归”之说。近年很多研究表明以当归作为主要药材的复方中药制剂具有改善痴呆小鼠学习记忆障碍的作用［5，6］，但是当归所起的作用及其相关机制目前还不清楚。因此本研究用Aβ25-35处理来源于人脑的SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞作为研究对象，以初步了解当归对Aβ引起的尼古丁受体表达降低及细胞毒性损害的拮抗作用，为当归在AD治疗中的应用提供理论依据。1材料与方法1材料与试剂当归药材产于甘肃，购于贵阳市三桥药材市场，经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定。当归水煮提取物制剂由贵阳医学院药学院提供，浓度为：1g生药/ml；源于人脑的神经母细胞瘤细胞株购自GermanCollectionofMicroorganismsandCellCultures公司；Aβ25-35购自Sigma公司；DMEM培养液购自GibcoIntrovagen公司；小牛血清购自华美公司；MTT比色法主要试剂购自Sigma公司；羊抗a3、a7及鼠抗β-肌动蛋白膜、ECL-Plus发光试剂、高效显影胶片购自Amersham