利用无选择标记表达载体获得转TPS1基因的百脉根的中期报告.docx
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利用无选择标记表达载体获得转TPS1基因的百脉根的中期报告本实验旨在利用无选择标记表达载体pCAMBIA1300-TPS1转化百脉根,将TPS1基因导入百脉根基因组中,通过检测转化植株根部的基因表达和甜菜素脱氢酶(SAD)活性,评估TPS1基因的转化效率和功能表达情况。实验分为以下步骤:1.构建表达载体:利用PCR扩增TPS1基因,将其克隆到表达载体pCAMBIA1300中,得到重组载体pCAMBIA1300-TPS1。2.农杆菌介导转化百脉根:将重组载体pCAMBIA1300-TPS1转化农杆菌LBA4404中,通过菌液接种百脉根,利用组织培养技术培养转化植株。3.获取转化植株:将经过筛选的转化植株转移到MS培养基中继续培养,生长至幼苗阶段后进行PCR检测,筛选出含有TPS1基因的转化植株。4.检测转化植株的基因表达:利用RT-PCR技术检测筛选出的转化植株根部组织中TPS1基因的表达情况。5.检测转化植株的甜菜素脱氢酶(SAD)活性:利用SAD酶活性检测的方法检测筛选出的转化植株根部组织中SAD酶活性是否增强。本期实验已完成前三个步骤,得到了22株潜在的转化植株。下一步将进行RT-PCR检测和SAD酶活性检测,并继续筛选出高效表达TPS1基因和具有增强SAD酶活性的转化植株。