重组人HMGB1蛋白主动免疫对小鼠乳腺癌影响的初步评估的任务书任务书一、研究背景及意义乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升，目前全球每年约有180万新发乳腺癌病例。传统的治疗方法包括手术、放疗和化疗等，但是这些治疗方法都具有一定的毒副作用，且易产生耐药性。因此，开发新的治疗手段势在必行。HMGB1是高迁移族细胞抗原结合蛋白-1的简称，是一种核心蛋白，广泛存在于哺乳动物细胞中，其结构主要由两个保守的DNA结合结构域A和B以及一个亚细胞位置信号组成。研究表明，HMGB1在癌症发生发展过程中发挥着至关重要的作用，可通过多种途径促进肿瘤细胞增殖、侵袭、转移、耐药等，因此被认为是一种重要的癌症治疗靶点。在针对HMGB1的治疗中，研究人员常用重组人HMGB1蛋白作为抗癌药物与癌细胞对抗。本研究旨在通过对重组人HMGB1蛋白进行主动免疫治疗，评估其对小鼠乳腺癌的治疗效果，为HMGB1在乳腺癌治疗中的应用提供实验依据。二、研究内容及方法1.研究内容（1）制备重组人HMGB1蛋白使用大肠杆菌表达体系，以pET-28a-HMGB1为模板，将HMGB1基因克隆到表达载体pET-28a中，转化至大肠杆菌BL21中，进行表达、纯化。（2）制备HMGB1蛋白免疫小鼠将纯化后的HMGB1蛋白与完全佐剂混合，给药于BALB/c小鼠，制备HMGB1蛋白免疫小鼠模型。（3）进行免疫治疗将HMGB1蛋白免疫小鼠分为实验组和对照组，分别注射HMGB1蛋白和PBS，观察治疗效果。（4）评估治疗效果通过测定肿瘤体积、肿瘤组织切片染色等方法，评估治疗效果。2.研究方法（1）基因克隆：使用PCR方法从人体cDNA制备目的基因的DNA模板，引物的设计和序列比对分析，构建目的基因的表达载体。（2）细胞培养：使用甲基已基纤维母细胞株（MCF-7）作为研究对象，体外培养。（3）蛋白表达：使用大肠杆菌表达体系，以pET-28a-HMGB1为模板，将HMGB1基因克隆到表达载体pET-28a中，转化至大肠杆菌BL21中进行表达、纯化。（4）动物实验：使用BALB/c小鼠作为实验对象，分别制备HMGB1蛋白免疫小鼠和对照小鼠。（5）数据处理：统计学方法进行数据处理和结果分析。三、预期成果及意义通过制备HMGB1蛋白免疫小鼠，评估其对小鼠乳腺癌的治疗效果，预计可以得到以下结果：（1）HMGB1蛋白免疫治疗能够抑制小鼠乳腺癌的生长；（2）HMGB1蛋白免疫治疗对小鼠乳腺癌的转移有一定的抑制效果；（3）治疗安全性良好，无明显副作用。本研究对于进一步揭示HMGB1在乳腺癌发生发展中的作用，为HMGB1作为靶点的乳腺癌治疗提供了实验依据。