输血科常见试验问题的探讨2、间接抗球蛋白试验原理:抗体首先与红细胞结合,洗涤,然后再与抗球蛋白抗体反应。方法:试管法,微柱凝胶法(配血卡,抗筛卡)。特点:可检出IgG抗体或可致敏得补体成分。应用:交叉配血,抗体筛选,抗体鉴定。关键:红细胞浓度(0、8%,2-5%),37℃孵育时间。试管法:充分洗涤红细胞。微柱法:离心速度和时间(1000rpm×10min),血清与红细胞需混合后孵育。3、直接抗球蛋白试验原理:抗体或补体致敏得红细胞洗涤后直接与抗球蛋白抗体反应。方法:试管法,微柱法。应用:可检出IgG抗体或补体致敏得红细胞(自身免疫病)。关键:红细胞浓度(0、8%,2-5%),试管法:充分洗涤红细胞。4、抗体筛选原理:间接抗球蛋白试验。血清与试剂红细胞混合,37℃孵育,离心。方法:微柱凝胶法。应用:可检出血清中抗红细胞IgG抗体或可致敏红细胞得补体成分。关键:应用前微柱卡离心,红细胞浓度0、8%),血清与红细胞需混合后37℃孵育,离心速度和时间1000rpm×10min)。5、聚凝胺交叉配血试验原理:聚凝胺中和红细胞表面得负电荷缩小红细胞之间得距离,LISS增强可以抗体之间得结合力,离心产生凝集现象,加入解聚液消除聚凝胺正电荷,有IgM或IgG抗体产生得凝集不散开,非特异性凝集则散开。应用:可检出血清中IgM或尤其就是IgG类抗红细胞抗体关键:按标准操作程序非常重要,就是快速、敏感得交叉配血方法。红细胞浓度为5%,血清加入量,LISS加入量,离心速度和时间(3400rpm×15sec),30秒内观察结果等等。肝素抗凝血多加几滴聚凝胺,注意新鲜血标本产生溶血现象。6、吸收试验原理:红细胞表面抗原与相应抗体孵育产生结合反应。已知抗体可检测红细胞表面未知抗原,已知红细胞表面抗原可检测未知血清中得抗体。应用:血型亚型得鉴定,抗体特异性鉴定,血清自身抗体吸收后用于血型鉴定和交叉配血试验。7、放散试验原理:与红细胞表面抗原结合得抗体通过热放散或乙醚放散等方法解离下来。应用:血型得鉴定,抗体特异性鉴定,得到自身抗体或无自身抗体得红细胞。8、凝集抑制试验(中和试验)原理:血清、唾液、胃液、精液、腹水以及卵巢液等体液中得血型抗原与已知相应抗体特异性结合,抑制抗体与红细胞得结合反应。应用:体液或组织中ABHLewis血型物质得鉴定,司法鉴定。9、新生儿溶血病得血清学试验婴儿和父母ABO血型鉴定新生儿标本检查:DAT,IAT,游离抗体(放散试验)。3、母亲标本检查:IgG抗A(B)效价,ABO以外抗体(试剂红细胞)。二、血型及血型鉴定(一)ABO,Rh(D)血型抗原得分子生物学1)H抗原和H基因:H基因位于19号染色体上,编码岩藻糖基转移酶,催化岩藻糖与前体物质支链末端得半乳糖相连接形成H抗原。群体中99、99％有H基因(Hh或HH),而hh即为孟买型,很少见,虽然有A、B基因,但红细胞上缺乏ABO系统得全部抗原。H基因得遗传与ABO基因无关,但A,B及H抗原全部都就是从相同得前身物质形成得。大家学习辛苦了，还是要坚持2)A、B抗原和A、B基因:A、B基因位于第九号染色体上(9q34、1-q34、2,跨越染色体18kb长度)。A基因编码N－乙酰胺半乳糖转移酶,使N－乙酰半乳糖胺与H抗原相连,形成A血型物质,在A型成人每个红细胞上可多达81－117万个血型A分子。B基因编码D－半乳糖转移酶,使D－半乳糖与H抗原相连,形成B血型物质,在B型成人每个红细胞上可多达61－83万个血型B分子。A和B基因都被遗传时(AB型),A分子大约有6万个(正定型A端可能会弱一些),B分子大约有72万个(正定型B端可能会强一些)。O型红细胞上只有高浓度得H抗原。ABH抗原在37周龄开始发育,但新生儿红细胞ABH得反应性没有成人强,位点数只有成人得25－50％,血型鉴定时应注意。3)ABO血型基因及编码氨基酸示意图A、B、O基因高度同源,A基因和B基因表达产物仅有4个氨基酸差异234567(外显子编号)9a23a17a16a12a45a225a(编码氨基酸数目)4)RH(D)抗原和基因基因位于1p34-36区域,由10个外显子组成,编码417aa得多肽,跨细胞膜存在表达其抗原性。RH血型基因:RHDd,Cc,Ee等位基因。单倍型:8种(2×2×2);基因型:8×(8＋1)/2＝36种。表型:用五种抗血清鉴定得表型有2(D,d)×3(C,c,Cc)×3(E,e,Ee)＝18种。5)D抗原表型得分类:正常D抗原:每个红细胞9万－33万个,200万个(D－－/D－－基因型)弱D:有正常得D抗原但数量