基因工程的基本内容基因工程的基本内容常用运载体：质粒、噬菌体和动植物病毒等。质粒：是基因工程最常用的运载体，最常用的质粒是大肠杆菌的质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状dna分子。特点：①含有抗性基因：大肠杆菌质粒中常含抗药基因，如：抗四环素的标记基因②基因组很小：细菌质粒的大小只有普通细菌染色体dna的百分之一③质粒能够“友好”地“借居”在宿主细胞中。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。④质粒的复制则只能在宿主细胞内完成。来源：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等细菌中都有质粒。（土壤农杆菌很容易感染植物细胞，使细胞生有瘤状物。培育转基因植物时，常常用土壤农杆菌中的质粒做运载体。）六.基因操作的基本步骤（一）取目的基因目的基因:是人们所需要的特定基因苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因种子的贮藏蛋白的基因人的胰岛素基因、干扰素基因等主要途径：①从供体细胞的dna中直接分离基因②人工合成基因。1.直接分离基因:最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。具体操作：供体细胞中的dna切成许多片段重组dna受体细胞（大量复制）基因扩增分离含有目的基因的细胞把带有目的基因的dna片段分离出来优点：操作简便缺点：①工作量大，具有一定的盲目性②真核细胞的基因含有不表达的dna片段，不能直接用于基因的扩增和表达主要应用：如许多抗虫、抗病毒的基因都可以用上述方法获得。2.人工合成基因：（1）逆转录法以目的基因转录成的信使rna为模板，反转录成互补的单链dna，然后在酶的作用下合成双链dna，从而获得所需要的基因。目的基因mrna单链dna双链dna（目的基因序列）（2）化学合成法根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使rna序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因蛋白质氨基酸序列mrna序列dna序列目的基因优点：目的性强，比较容易获得真核基因序列缺点：操作技术性强，不容易获取，基因表达不容易控制主要应用：如人的血红蛋白基因、胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得。重要发展：dna序列自动测序仪对提取出来的基因进行核苷酸序列分析，扩增dna技术（也叫pcr技术），使目的基因在短时间内成百万倍地扩增。a.目的基因与运载体结合b.将目的基因导入受体细胞常用受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。主要手段：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。质粒细菌目的基因扩增感受态细胞：能够接受外源dna的细胞将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒易进入受体细胞。c.目的基因的检测和表达1.转基因结果：①在全部受体细胞中，真正能够摄入重组dna分子的受体细胞很少②重组dna转移成功的受体细胞不一定能够表达③必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。2.检测的方法（1）抗性监测：（2）性状检测：受体细胞是否表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。，当前1234567