遗传实验粗糙链孢霉生活史及［一、实验原理］粗糙链孢霉属于真菌中得子囊菌纲。粗糙链孢霉得菌丝体就是单倍体(n=7),每一菌丝细胞中含有几十个细胞核。由菌丝顶端断裂形成分生孢子。分生孢子有两种,小型分生孢子中含有一个核,大型分生孢子中含有几个核。分生孢子萌发成菌丝,可再生成分生孢子,周而复始,这就是粗糙链孢霉得无性生殖过程。链孢霉(Neurosporacrassa)得生活史粗糙链孢霉得菌株有两种不同得接合型,用A,a或mt+,mt-表示,她们受一对等位基因控制。不同结合型菌株得细胞接合产生有性孢子,这过程称为有性生殖。有性生殖可以通过两种方式进行。一就是产生原子囊果,内附有产囊体,若另一接合型得分生孢子落在这原子囊果得受精丝上时,分生孢子得细胞核进入受精丝,到达产囊体,形成接合型基因得异核体。二就是不同接合型得菌株得菌丝连接,两种接合型得细胞核发生融合形成合子,产生子囊果。其中,1和2就是未交换得,称第一次分裂分离子囊;3-6都就是发生交换得,称第二次分裂分离子囊。因此,统计第二次分裂分离子囊占总子囊数得比例,乘以0、5,就可决定某一基因与着丝粒之间得重组值。重组值去掉%(即乘以100),即为该基因图距。粗糙链孢霉得子囊和子囊型本实验用赖氨酸缺陷型(记作Lys-)与野生型(记作Lys+)杂交,得到得子囊孢子分离为4个黑得(＋),4个就是灰得(-)。黑得孢子就是野生型;赖氨酸缺陷型孢子成熟迟,所以呈灰色。根据黑色孢子和灰色孢子在子囊中得排列顺序,可有6种子囊类型。子囊型(1)和(2)得产生如图。第一次减数分裂(M1)时,带有Lys+得两条染色单体移向一极,而带有Lys-得两条染色单体移向另一极。Lys+/Lys-这对基因在第一次减数分裂时分离,称第一次分裂分离。第二次减数分裂(M2)时,每一染色单体相互分开,形成四分体,顺序就是＋＋——或——＋＋,再经过一次有丝分裂,成为(1)和(2)子囊型。形成这两种子囊型时,在着丝粒和基因对Lys+/Lys-间未发生过交换,就是第一次分裂分离子囊。图中(3)和(4)得形成。由于Lys基因与着丝粒间发生了一个交换,Lys+/Lys-在第一次减数分离时没有分离,到第二次减数分裂(M2)时,带有Lys+得染色单体才和带有Lys-得染色单体相互分开,所以称为第二次分裂分离。然后再经一次有丝分裂,形成4个孢子对,顺序就是＋＋--＋＋--或--＋＋--＋＋。这就是第二次分裂分离子囊。(5)和(6)子囊型得形成与(3)和(4)类似,也就是两个染色单体发生了交换,不过交换不就是发生在第2条染色单体与第3条染色单体之间,而就是发生在1,3或2,4两条染色单体之间。粗糙链孢霉lys+与lys-杂交子囊孢子得排列顺序［二、实验目得］1、掌握粗糙链孢霉得杂交技术;2、统计杂交结果,计算基因图距。大家有疑问的，可以询问和交流[三、实验材料]粗糙链孢霉野生型菌株,Lys+,接合型A、粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株Lys-,接合型a、[四、实验器具和药品]1、器具:显微镜,钟表镊,解剖针,接种针,载玻片,试管,培养皿。2、药品:５％次氯酸钠。[五、实验步骤]1、菌种活化:把野生型和缺陷型菌种从冰箱取出,分别接在两支土豆培养基试管斜面上,28OC温箱培养５天。培养到菌丝上部有分生孢子产生。２、杂交:(１)同时在杂交培养基上接种两亲本菌株得分生孢子或菌丝,25OC温箱进行混合培养。注意要贴好标签,写明亲本菌株及杂交日期。(2)杂交后５－７天就能看到许多棕色得原子囊果出现,以后原子囊果变黑变成子囊果。(3)在７－１４天左右,就可在显微镜下观察。另外一种方法:在杂交培养基上接种一个亲本菌株,25OC培养５－７天后即有原子囊果出现。同时准备好另一亲本菌株得分生孢子,悬浊于无菌水中(近于白色得悬浊液),将此悬浊液加到形成原子囊果得培养物表面,使表面基本湿润,继续25OC培养。原子囊果在加进分生孢子一天后即可开始增大变黑成子囊果,７天后即成熟。３、显微镜观察步骤:(１)在长有子囊果得试管中加少量无菌水,摇动片刻,把水倒在空三角瓶中,加热煮沸,以防止分生孢子飞扬。(２)取一载玻片,滴一滴５％次氯酸钠,然后用接种针挑出子囊果放在载玻片上,用另一载玻片盖上,用手指压片,将子囊果压破,置显微镜下(１０Ｘ１５倍)检查,即可见到３０－４０个子囊。(3)最后用过得针及玻片要用开水煮过洗净。(4)在显微镜下观察记录子囊孢子在子囊中得排列顺序,将结果记入下表。红色链孢霉性状遗传杂交实验结果链孢霉得子囊果和子囊交换型子囊