第一章抗原抗体反应第一节抗原抗体反应的原理第二节抗原抗体反应的特点第三节影响抗原抗体反应的因素第四节免疫学检测技术的类型第一节抗原抗体反应的原理第一节抗原抗体反应的原理静电引力（electrostaticforces）范德华引力:作用最小（vanderWaalsinteractions）氢键:最具特异性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）l.静电引力2.范德华引力3.氢键结合力大家有疑问的，可以询问和交流4.疏水作用力抗体与抗原结合是可逆的反应，在平衡时其亲和常数K=抗原抗体复合物浓度游离抗原浓度×游离抗体浓度K代表抗体结合抗原的亲和力。K值大的抗体与抗原牢固结合，不易解离，称该抗体有高亲和力。三、亲水胶体转化为疏水胶体第二节抗原抗体反应的特点特异性：抗原与抗体结合反应的专一性两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应二、可逆性Ag与Ab的结合常需适当比例才出现可见反应，在最适比例时反应最明显；这种现象可以用“格子学说”来解释：Ab(IgG)为二价，Ag通常为多价，只有Ag，Ab结合形成大的复合物，肉眼才可见。格子学说只有当Ag与Ab比例适当时，才能形成大的复合物，比例不适当，就只能形成小的复合物而抑制反应现象的出现，此所谓带现象；前带现象：Ab过剩，Ag过少；稀释Ab，凝集反应常见；后带现象：Ag过剩，Ab过少；稀释Ag、沉淀反应常见。前带现象前带(prezone)：抗体过量后带(postzone)：抗原过量等价带(equivalencezone)：抗原抗体比例合适第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、沉淀和细胞溶解等现象第三节影响抗原抗体反应的因素一、反应物自身因素1、抗原抗原的理化性状、抗原决定簇的数目和种类均可影响血清学反应结果例如，可溶性抗原与相应抗体反应出现沉淀，而颗粒性抗原与相应抗体反应则出现凝集；单价抗原与抗体结合不出现可见反应；粗糙型细菌在生理盐水中易出现自凝；红细胞与IgG类抗体结合不出现直接凝集等。抗体对反应的影响表现在以下三个方面:(1)来源:来自不同动物的免疫血清，其反应性有差异。家兔等大多数动物的免疫血清具有较宽的等价带，通常在抗原过量时才易出现可溶性免疫复合物；马等大动物和人的免疫血清等价带较窄，少量的抗原或抗体过剩，均可形成可溶性免疫复合物；家禽免疫血清不能结合哺乳动物的补体，并且在高盐浓度（8.5%NaCl）溶液中沉淀现象明显。单克隆抗体一般不适用于沉淀反应或凝集反应。(2)特异性与亲和力:（3）浓度:抗体的浓度往往是与抗原相对而言。合适的浓度才出现明显的反应现象。因此许多试验应进行抗体预滴定，找出最适反应浓度。l.电解质抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在，就会使抗原抗体失去一部分电荷而相互凝集或沉淀，出现可见反应;若无电解质存在，则不出现可见反应。通常在血清学试验中，以8.5%NaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反应液，其中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝集物。但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。2.酸碱度合适的pH是抗原抗体反应的必要条件之一。血清学试验一般以pH6-9为宜，超出此范围可影响抗原和抗体的理化性质，导致假阳性或假阴性结果。当pH为3左右时，接近细菌抗原的等电点，可出现非特异性酸凝集，造成假象。3.温度抗原抗体反应一般在15-40℃范围内均可进行，最适温度为37℃。在此范围内温度越高，分子运动速度加快，增加抗原抗体接触机会，反应速度越快，但亦容易引起复合物解离;温度越低，反应速度缓慢，但抗原抗体结合牢固，易于观察。某些特殊的抗原抗体反应需要特定的温度，如冷凝集素在4℃时与红细胞结合，20℃以上反而解离。4、作用时间此外，抗原抗体反应在液相中反应时，适当振荡与搅拌，也可促进抗原抗体分子的接触，加速反应。电解质:生理盐水或缓冲液酸碱度:pH6～pH9温度:15℃～40℃，37℃最适反应类型反应类型原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如果二者相应，则可在抗原、抗体两液接触界面形成白色的沉淀环原理：可溶性Ag与Ab在含有电解质的半固体（1%）琼脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散相遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相遇处形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀带对于组成它的Ag、Ab具有特异地不可透过性，而对其它的Ag与Ab是可透过的，所以一条沉淀带仅代表一种AgAb系统的沉淀物。检测抗原制备技术来源于病原体及其病原体的代谢、分泌和排泄