H9亚型禽流感病毒单抗的制备及其抗原捕获ELISA方法的建立的中期报告本研究旨在制备针对H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体以及建立一种抗原捕获ELISA检测方法。此次为中期报告，主要介绍制备过程和初步实验结果。（一）单克隆抗体制备1.固相抗原制备蛋白A纯化柱洗涤溶液中加入H9亚型禽流感病毒，加入1×PBS缓冲液揉洗后，用1×PBS缓冲液洗涤3次，最后用0.1M的酸性缓冲液洗涤一次，得到纯化的病毒固相抗原。2.动物免疫和细胞融合BALB/c小鼠腹腔注射纯化的病毒固相抗原，免疫3周后，提取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合制备杂交瘤细胞。3.克隆筛选将杂交瘤细胞分别接种在96孔板中，进行限稀和群体限稀。将单个细胞克隆分离后，进行抗原ELISA筛选和细胞克隆扩大培养。（二）抗原捕获ELISA检测方法的建立1.化学修饰将H9亚型禽流感病毒表面的HA抗原进行化学修饰，使其能够稳定地吸附在被涂抗体的微孔板上。2.抗体涂覆在96孔ELISA板中，加入对H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体，进行涂覆。3.样品添加及检测将H9亚型禽流感病毒标准物质或待检样品加入已经涂有单克隆抗体的ELISA板中，进行孵育和洗涤后加入检测抗体，在添加底物后进行比色，根据光密度值来判断标准物质或待测样品中是否有病毒存在。（三）初步实验结果1.单克隆抗体制备经过限稀和群体限稀后，筛选到了2个具有对H9亚型禽流感病毒的特异性的白细胞杂交瘤。2.抗原捕获ELISA检测方法的建立本实验成功建立了一种抗原捕获ELISA检测方法，通过已知病毒数量的标准物质和待检样品的检测，初步证实了该方法对H9亚型禽流感病毒的检测敏感性高、特异性好。综上所述，目前本研究已完成了针对H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体制备和抗原捕获ELISA检测方法的建立，下一步将进一步完善和优化这两项研究内容，并对该方法的其他相关性能进行验证。