背景资料环境和人群暴露水平流行病学和毒理学研究结果研究方向背景资料湖泊、水库等水域的植物营养成分（氮、磷等）不断补给，过量积聚，致使水体营养过剩的现象称为水体“富营养化”。滇池水华藻类迅速繁衍水质污浊发臭透明度下降感观性状恶化水中溶解氧不足鱼类及其他生物大量死亡加速水域的消亡过程产毒藻种产毒藻种饮用水中的微囊藻毒素MC-LR环境暴露和人群暴露水平检测方法生物测试法原理：PP1和PP2A可强烈专一性促进糖原磷酸化酶a的水解，而MCYST又可与PP1和PP2A共价结合，抑制其活性。据此，以32p标记糖原磷酸化酶a，三者相互作用，根据32p的释放量来测定样品中MCYST的含量。优点：检测限低（pg级），反应灵敏，可检测样品中总MC的含量。缺点：易受其它因素的影响结果偏高：功能性测试结果偏低：内源性蛋白磷酸酶活性原理：利用毒素诱发免疫反应产生抗体，利用抗体对抗原的特异性识别来对各种毒素进行检测。微囊藻毒素的免疫学特点优点：检测限低（ng级），一般灵敏度较高，适合作为筛检实验检测样品中总MC的含量。缺点：商品化的试剂盒来源有限，有交叉反应，特异度变化较大。固定相：C18硅胶柱流动相：乙腈或甲醇等极性溶剂，以TFA调节pH及离子对检测器1.紫外(UV)检测2.荧光(FL)检测3.化学发光(CL)检测定性：以标准品的保留时间为对照定量：标准曲线法优点：能准确定性定量，灵敏度好，选择性好缺点：必需标准品作对照，样品处理复杂，仪器昂贵，技术复杂LC-MS法环境暴露和人群接触水平我国部分饮用水源水中MC-LR的污染情况本课题组建立的HPLC条件标准曲线工作曲线回收率精密度标准曲线毒性表现急慢性毒性急慢性毒性急慢性毒性胚胎和发育毒性胚胎和发育毒性遗传毒性和相关终点致/促癌性致/促癌性致/促癌性肾脏毒性其它流行病学资料流行病学资料课题组的工作积累藻类粗毒素的亚急性在体实验藻类粗毒素致肝脏病理学改变藻类粗毒素致肝脏病理学改变藻类粗毒素致肾脏病理学改变藻类粗毒素致肝脏超微结构的变化藻类粗毒素致肝脏超微结构的变化藻类粗毒素致肾脏超微结构的变化藻类粗毒素致氧化应激藻类粗毒素亚急性染毒致大鼠肝脏和肾脏匀浆中MDA含量（nmol/mg蛋白）的变化藻类粗毒素亚急性染毒致大鼠肝脏和肾脏匀浆中GSH含量（nmol/mg蛋白）的变化藻类粗毒素亚急性染毒致大鼠肝肾匀浆中TSOD、CuZnSOD和MnSOD含量（mg/mg蛋白）的变化高剂量染毒组中C-fos、C-Jun基因的表达藻类粗毒素亚急性染毒（肝脏免疫组化）藻类粗毒素致肝脏PCNA，P53，bcl-2变化对照组肝脏TUNEL藻类粗毒素致肝细胞凋亡离体实验设计MC-LR对原代培养大鼠肝细胞形态学影响MC-LR对原代培养大鼠肝细胞形态学影响MC-LR对原代培养大鼠肝细胞形态学影响MC-LR对大鼠原代肝细胞增殖的影响MC-LR对大鼠原代肝细胞伸展的影响MC-LR对大鼠原代肝细胞伸展的影响MC-LR对大鼠原代肝细胞周期和细胞凋亡的影响MC-LR对大鼠原代肝细胞周期和细胞凋亡的影响藻毒素的遗传毒性藻类提取物致突变性汇总表DNA损伤HL-7702细胞彗星试验(400×)KB细胞彗星试验(400×)结论氧化损伤LDH剂量时间反应关系MDA剂量时间反应关系GSH剂量时间反应关系CAT剂量时间反应关系SOD剂量时间反应关系结论毒理学研究的瓶颈和前景饮用水源水中蓝藻细胞密度限值中国湖泊（水库）部分参数与chla的相关关系rij及rij2值※技术路线图研究内容水处理工艺去除原水中总MC-LR效率生态学研究—藻细胞密度和MC-LR的关系根据回归方程估算的藻细胞密度生态学研究—蓝藻细胞密度和MC-LR的关系上海源水微囊藻毒素LR的检出情况蓝藻细胞密度与MC-LR浓度之间相关性研究根据回归方程估算的蓝藻细胞密度实验室生态学研究结果y=-3.92+2.04x(r=0.70,p<0.001),y:MC-LR浓度(μg/L),x:实验室铜绿微囊藻细胞密度(106/ml)藻细胞毒性研究藻细胞毒性研究藻细胞裂解液经腹腔注射染毒的LD50藻细胞裂解液毒性测试中主要指标的BMDL藻类NOAEL:4×104cell/kgBW蓝藻NOAEL:1.6×104cell/kgBW推荐标准值——藻/蓝藻细胞可行性分析局限性分析致谢！