Polh-Cry3Aa融合蛋白原核表达载体的构建及其表达研究的开题报告本研究旨在构建Polh-Cry3Aa融合蛋白原核表达载体，利用大肠杆菌作为表达宿主，探究该融合蛋白的表达情况及其生物活性。第一部分：前期研究1.Cry3Aa基因的克隆和表达本研究利用PCR技术从Bacillusthuringiensis子孢细胞中克隆Cry3Aa基因，并将其克隆至pET-28a(+)-Cry3Aa表达载体中。将重组表达载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)细胞中，利用IPTG诱导蛋白表达，利用SDS-PAGE对目的蛋白纯度进行检测。2.Polh基因的克隆Polh基因是指蜡螟NPV的一个病毒蛋白，其具有良好的溶解与屏障特性，可用于蛋白表达的纯化。本研究利用PCR技术从蜡螟NPV基因组中克隆Polh基因，并将其纳入pET-28a(+)载体中，进行重组表达载体的构建。第二部分：研究内容与方法1.Polh-Cry3Aa融合蛋白载体的构建将Polh基因和Cry3Aa基因分别克隆至pET-28a(+)载体中，并采用双酶切和连接方法构建Polh-Cry3Aa融合蛋白的重组表达载体。利用测序技术对构建结果进行鉴定。2.融合蛋白表达条件的优化在大肠杆菌BL21(DE3)中，通过改变菌种密度、诱导时间、IPTG浓度等条件，以达到蛋白的最好表达情况。3.融合蛋白的纯化与活性分析通过Ni-NTA亲和层析法对蛋白进行纯化，然后采用Westernblot、质谱技术、生物活性方法等技术手段对融合蛋白的纯度和生物活性进行检测和分析。第三部分：预期结果及意义本研究预计构建成功Polh-Cry3Aa融合蛋白表达系统，获得融合蛋白，并对融合蛋白的纯化及活性进行分析。该融合蛋白可作为一种新型昆虫抗虫剂，具有显著的抗虫活性，同时具有工艺途径简单、绿色环保等优点，具有重要的应用前景。