HPLC流动相的注意事项>>流动相的作用流动相具有运载样品分子的作用。流动相还具有选择性分离的作用。当固定相一定时，流动相的种类、配比和流动速度都严重影响分离效果。>>流动相的种类液相色谱所用流动相根据分析目的可分为单一或混合流动相。混合流动相还可分为比例固定和比例可变流动相。梯度洗脱就是使用比例可变流动相。>>流动相使用的注意事项流动相的级别流动相的处理——过滤和脱气流动相的置换>>流动相的级别-水水是最常见的极性溶剂HPLC用水的要求：纯化水（重蒸水）因为不纯物的存在，去离子水的吸光率较高。纯化水中去除了无机和有机的污染物，因此吸光率降低。>>流动相的级别-有机试剂采用“HPLC”级溶剂溶剂级别1、都经过蒸馏和0.45um滤膜的过滤(除纤维毛、未溶解的机械颗粒等）。–HPLC级2、优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有极微量的防腐剂和抗氧化剂，这些添加剂往往有紫外吸收。–优级纯3、HPLC级经过0.2um滤膜的过滤,且除去有紫外吸收的杂质。–分析纯>>分析纯级和HPLC级溶剂的吸光度比较图>>流动相的处理——过滤?使用0.45um或更小孔径滤膜过滤，注意滤膜的种类。?目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞管路和色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液时。>>滤膜类型1、聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。2、醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。3、尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。4、再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂。>>过滤的注意事项?不同的试剂分别过滤，过滤后再混合。?注意滤膜的选择，不要混用。?要现用现处理，尤其是水和缓冲液。?要注意操作过程中的防尘。?试样也必须过滤，可用一次性针头式过滤器。>>流动相的处理——脱气?目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡。?使用梯度洗脱时要有在线脱气装置。?气泡对测定的影响：1、造成压力波动，影响保留时间。2、色谱柱中的气泡会造成峰变形。3、检测池中的气泡会造成基线波动。>>脱气的方法?1、超声波振荡脱气?2、氦气置换清除法?3、使用树脂膜的减压脱气法?应根据实际的使用情况选择合适的脱气方法。单一流动相或配合好的混合流动相可以采用超声振荡脱气，梯度洗脱最好使用在线减压脱气。>>氦气置换清除法>>使用树脂膜的减压脱气法>>流动相的置换?极性相似的试剂可以直接置换。?极性不同的试剂，应用中间试剂作过渡。例如：甲醇置换为正己烷时，可以考虑选择异丙醇作为中间试剂。?缓冲液的置换应先用水冲洗，再用有机试剂置换水。直接使用有机试剂会造成盐的结晶，堵塞管路和色谱柱。