AMPKCnrk1在里氏木霉纤维素酶基因表达调控中的功能研究中期报告1.前言纤维素酶在生物质转化中具有重要作用，是研究生物质资源开发利用的热点。里氏木霉是重要的木材生物质转化微生物之一，其纤维素酶在环境适应、生长发育、代谢调控等方面发挥着重要作用。其中，AMP-activatedproteinkinase（AMPK）是一种重要的代谢调节因子，在真核生物中广泛存在，并发挥着重要的调节代谢过程的作用。然而，目前对于AMPK在里氏木霉纤维素酶基因表达调控中的功能尚不明确。因此，本研究旨在从AMPK对里氏木霉纤维素酶基因表达调控中的功能进行深入的探讨。2.研究内容与进展2.1研究内容本研究从AMPK对里氏木霉纤维素酶基因表达调控中的功能进行深入探讨，具体包括以下研究内容：1.构建AMPK基因敲除菌株，分析纤维素酶活性及转录水平的变化。2.分离纯化AMPK蛋白，通过荧光共振能量转移（FRET）技术探究AMPK与其下游信号通路的相互作用。3.通过RNA-seq分析AMPK缺失对里氏木霉基因表达的全基因组影响，筛选与纤维素酶合成相关的基因表达变化。2.2研究进展目前，我们已经完成了以下工作：1.成功构建了里氏木霉的AMPK基因敲除菌株，并通过纤维素酶活性及转录水平的分析，初步探究了AMPK在纤维素酶基因表达调控中的作用。2.分离纯化了里氏木霉的AMPK蛋白，并利用FRET技术成功探究了AMPK与其下游信号通路的相互作用，为后续的研究提供了基础。3.通过RNA-seq实验，已经获得了AMPK缺失对里氏木霉基因表达的全基因组影响的初步结果，并筛选出了与纤维素酶合成相关的基因表达变化。3.下一步计划在完成以上工作的基础上，我们的下一步研究计划如下：1.进一步深入探究AMPK在里氏木霉纤维素酶基因表达调控中的作用，包括探究不同信号通路对于AMPK活性的影响，进而细化AMPK的调控层级；2.利用RNA-seq实验进一步分析与纤维素酶合成相关的基因表达变化，挖掘潜在的调控机制；3.建立里氏木霉纤维素酶的动态转录调控模型，模拟条件变化下的基因表达变化规律，揭示AMPK在里氏木霉纤维素酶合成调控中的作用机制。