第一部分EphA2基因的介绍EphA2与肿瘤的关系154例大肠腺癌组织和相应正常大肠粘膜组织均来自郑州大学第一、二附属医院和河南省肿瘤医院2001年1月~2004年12月手术切除标本的存档蜡块(其中66例为手术切除新鲜标本和蜡块和88例存档蜡块)临床病理资料66例新鲜手术切除标本均为大肠腺癌：分化程度:高分化腺癌30例，中分化腺癌23例，低分化腺癌13例。浸润深度:粘膜层10例，粘膜下层0例，肌层14例，浆膜层37例，外周组织5例。转移：有淋巴结转移者16例，无淋巴结转移者50例；有血道转移者1例，无血道转移者65例；无种植性转移。88例存档蜡块全部为腺癌:分化程度：高分化腺癌21例，中分化腺癌18例，低分化29例和未分化20例；浸润深度：粘膜层62例，粘膜下层1例，肌层17例、浆膜层5例，外周组织3例；转移：有淋巴结转移者14例，无淋巴结转移者74例；有血道转移者11例，无血道转移者77例；有种植性转移者10例，无种植性转移者78例。技术路线一.免疫组化步骤（略）对照组设计：以已知EphA2阳性食管鳞癌和正常食管粘膜腺体组织切片作为阳性对照，用正常兔IgG代替一抗作为阴性对照，用PBS代替一抗作为空白对照。免疫组化结果判定及定量分析：EPhA2免疫组化阳性表达位于细胞胞浆，呈棕黄色。定量分析采用高清晰图像处理系统，随机取10个高倍视野进行图像分析，对免疫组化切片检测EphA2阳性细胞数，依据阳性细胞所占肿瘤细胞面积的百分比和染色强度判断结果。二.组织中总RNA的提取及RT-PCR步骤（略）RNA浓度的测定（略）对照设置：（1）阴性对照：以去离子水代替提取的总RNA，结果阴性。（2）内参对照：用β-actin作为内参引物，与EphA2和KAI1引物分别同管扩增，结果在紫外灯下出现一条330bp的荧光带结果判定阳性判断标准为：目的EphA2基因RT-PCR产物凝胶电泳后在紫外灯下分别出现一条586bp的荧光带。取大肠腺癌和正常大肠粘膜组织0.5gFCM对照组设计和诊断标准：FCM计算标准：统计学处理结果EphA2mRNA及蛋白表达与大肠腺癌的关系：免疫组化结果免疫组化检测结果：EphA2蛋白定位于癌细胞、粘膜上皮细胞及癌组织血管内皮胞浆内，呈棕黄色。阴性对照均无阳性显示。正常粘膜116(75.3)6(3.9)26（16.9）6（3.9）1.369±0.663腺癌12（7.8）32（20.8）48（22.7）62（40.3）4.789±0.542正常粘膜组织中EphA2蛋白表达SP法×200二.EphA2蛋白表达在大肠腺癌癌细胞与癌组织中血管内皮细胞的比较大肠腺癌组织中癌细胞和血管内皮细胞EphA2蛋白的表达SP法×400三、EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系（A)临床病理EphA2蛋白表达例数(%)学因素例数0级I级II级III级PEphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系(C)EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系(D)EphA2蛋白表达与大肠腺癌的关系(E)EphA2在大肠腺癌中的表达SP法×200EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,强度I级EphA2在大肠腺癌中的表达SP法×200EphA2在大肠腺癌中的表达SP法×200EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,强度III级EphA2在大肠腺癌组织中的表达SP法×200EphA2蛋白阳性染色定位在肿瘤区域和血管内皮细胞EphA2基因RT-PCR结果EphA2基因RT-PCR结果：经RT-PCR扩增，目的条带为586bp。与EphA2引物同管扩增的β-actin内参引物为330bp的荧光条带。以去离子水代替提取的总RNA的阴性对照无任何荧光条带显示。一.EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系临床病理Eph2mRNAEphA2/β-actin学因素例数+－P(X±S)PEphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系(B)EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系(C)EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系(D)123456MAEpha2→→700bpBβ-actin→300bp二.大肠腺癌中EphA2蛋白表达与EphA2mRNA表达的关系大肠腺癌中EphA2蛋白表达与EphA2mRNA表达的关系不同级别EphA2蛋白表达的大肠腺癌中的EphA2mRNA表达FCM检测结果一.大肠腺癌和正常组织中DNA含量和DNA倍体一.大肠腺癌和正常组织中DNA含量和DNA倍体的比较二.大肠腺癌DNA含量和DNA倍体与病理临床因素的关系二.大肠腺癌DNA含量和DNA倍体与病理临床因素的关系(A)大肠腺癌DNA含量