河南农业科学，2023，52（2）：145‑150JournalofHenanAgriculturalSciencesdoi：10.15933/j.cnki.1004‑3268.2023.02.016奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌PCR和LAMP检测方法的建立罗阳1，田唯嘉1，2，何芳1，浣成1，刘伯承1，张佰忠1，宋武1，杨青2，易康乐1（1.湖南省畜牧兽医研究所，湖南长沙410131；2.湖南农业大学动物医学院，湖南长沙410125）摘要：为快速鉴定因肺炎克雷伯菌侵染引起的奶牛乳房炎，进一步为该疾病提供更合理的治疗方案，分别以肺炎克雷伯菌16S-23SrDNA内部转录间隔层序列（Internaltranscribedspacer，ITS）和脲酶UreD基因为靶点，利用PCR技术和环介导等温扩增技术（Loop‑mediatedisothermalamplification，LAMP）构建奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌快速鉴定方法。结果表明，利用PCR技术扩增ITS序列能准确鉴定出肺炎克雷伯菌，在核酸质量浓度为5×10-2ng/μL的环境中依然能实现稳定扩增；利用LAMP技术扩增UreD基因的最佳反应温度为62℃，其最低检测核酸质量浓度为5×10-7ng/μ，L检测灵敏度是PCR方法的105倍。综上，建立了PCR技术和LAMP技术快速鉴定奶牛乳房炎型肺炎克雷伯菌的方法，特异性强且灵敏度高。关键词：奶牛乳房炎；肺炎克雷伯菌；UreD基因；PCR；LAMP中图分类号：S852.61文献标志码：A文章编号：1004-3268（2023）02-0145-06EstablishmentofPCRandLAMPMethodsforDetectionofKlebsiellapneumoniaefromDairyMastitisLUOYang1，TIANWeijia1，2，HEFang1，HUANCheng1，LIUBocheng1，ZHANGBaizhong1，SONGWu1，YANGQing2，YIKangle1（1.HunanInstituteofAnimalandVeterinaryScience，Changsha410131，China；2.CollegeofVeterinaryMedicine，HunanAgricultureUniversity，Changsha410125，China）Abstract：ThepurposeofthisstudyistoquicklyidentifydairymastitiscausedbyKlebsiellapneumoniae，soastoprovidemostreasonabletreatmentplanforthisdisease.RapididentificationmethodsofKlebsiellapneumoniaewereestablishedusingPCRandloop‑mediatedisothermalamplification（LAMP）basedontheinternaltranscribedspacer（ITS）sequenceof16S‑23SrDNAandureaseUreDgene，respectively.TheresultsshowedthatKlebsiellapneumoniaecouldbeaccuratelyidentifiedbyITSgenesequence，andamplifiedstablywhenthenucleicacidconcentrationwas5×10-2ng/μL.TheoptimaltemperatureandthelowestnucleicacidconcentrationbyLAMPwere62℃and5×10-7ng/μ，Lrespectively，moreover，LAMPdetectionsensitivitywas105timesthatofPCRreaction.High‑specificityand‑sensitivityrapididentificationmethodsareestablishedinthisstudyusingPCRandLAMPtechniques，fordairymastitiscausedbyKlebsiellapneumoniae.Keywords：Dairymastitis；Klebsiellapneumoniae；UreDgene；PCR；Loop‑mediatedisothermalamplification（LAMP）收稿日期：2022-06-27基金项目：湖南省重点研发计划项目（20