课题3血红蛋白的提取和分离(一)蛋白质分离和提取的原理高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？（二）蛋白质提取和分离的方法1.凝胶色谱法3.凝胶色谱法的原理—分子筛效应2.电泳3)类型:讨论：如何测定蛋白质的分子量？血液(三)缓冲溶液二.实验操作二、实验操作1.洗涤红细胞1.洗涤红细胞2.释放血红蛋白3.分离血红蛋白(3)分离血红蛋白溶液：2、血红蛋白的粗分离----透析：透析过程动画演示纯化——凝胶色谱法纯度鉴定观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。凝胶色谱柱注意：正确的加样操作（1）不要触及和破坏凝胶面（2）贴壁加样（3）使吸管管口沿管壁环绕移动。1.凝胶色谱法二、实验操作3.分离血红蛋白2、血红蛋白的粗分离----透析：纯度鉴定注意：正确的加样操作（1）不要触及和破坏凝胶面（2）贴壁加样（3）使吸管管口沿管壁环绕移动。