RAD18基因敲除通过抑制FABRCA通路增强肺癌细胞对顺铂的敏感性中期报告前言肺癌是世界上最常见的癌症类型之一，其中，非小细胞肺癌（NSCLC）占据了多数。虽然近年来NSCLC的治疗方案已有所进步，然而顺铂仍然是NSCLC的标准一线化疗药物。然而，顺铂治疗常常会出现耐药性，从而限制了其应用。因此，研究耐药机制，探索提高化疗治疗效果的方法，具有重要的意义。前期的研究表明，RAD18基因敲除可以增强肺癌细胞对顺铂的敏感性，但其具体的分子机制尚未明确。本文旨在研究RAD18基因敲除对FABRCA通路的影响，并探讨其在顺铂耐药机制中的作用。实验设计与方法细胞系和试剂使用高侵袭性NSCLC细胞株A549和顺铂敏感细胞株H1299，两者都来自于美国细胞库。试剂包括顺铂，CYT387和Niraparib。基因敲除和表达分析通过转染实现RAD18基因敲除，使用WesternBlot检测RAD18，留样进行QuantitativeReal-timePCR分析RAD18的表达情况。细胞增殖和凋亡分析MethylThiazolylTetrazolium(MTT)assay用于检测细胞增殖率，CCK-8assay用于检测细胞毒性。AnnexinV-FITC/PI功能分析仪用于检测细胞的凋亡率。免疫共沉淀和WesternBlot使用免疫共沉淀和WesternBlot检测FABRCA通路中相关蛋白的表达，包括BRCA1、BRCA2、FANCD2和RAD51。同时，还检测了AKT信号通路和Wnt信号通路相关蛋白的表达，以验证FABRCA通路是否受到其他信号通路的影响。结果RAD18基因敲除增强细胞对顺铂的敏感性MTTassay和CCK-8assay结果显示，RAD18基因敲除可显著增强A549和H1299细胞对顺铂的敏感性，其IC50值均相应降低。RAD18基因敲除活化FABRCA通路实验结果表明，RAD18敲除导致FABRCA通路相关蛋白BRCA1、BRCA2、FANCD2和RAD51表达量上调，且AKT信号通路和Wnt信号通路的相关蛋白表达量未发生明显改变。讨论和结论本研究表明，RAD18基因敲除可以增强肺癌细胞对顺铂的敏感性，并且其作用机制涉及FABRCA通路的活化。这一结果进一步证明了FABRCA通路在肺癌细胞顺铂耐药机制中的关键作用。FABRCA通路是DNA损伤应答途径中的一条重要通路，其作用是参与DNA双链断裂的修复。本研究结果显示，RAD18基因敲除活化FABRCA通路，增强NSCLC细胞对顺铂的敏感性。因此，FABRCA通路可能成为一种用于改善化疗效果的新靶点。总之，本研究揭示了RAD18/FABRCA通路/顺铂耐药之间的关系，并且为开发新的肺癌化疗策略提供了实验依据。不过，我们仍需进一步探索FABRCA通路在肺癌中的生物学特性和致癌机制，以加深对其作用机制的理解。