微生物菌种鉴定与保藏内容菌种筛选菌种鉴定菌种保藏微生物代谢产物的平板检测方法46影印法显微镜第一代第二代第三代大家学习辛苦了，还是要坚持细菌的形态和结构观察细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、鉴别染色、特殊染色。霉菌是由交织在一起的菌丝体构成。菌丝呈管状，有的有横隔将菌丝分割为多细胞（如青霉、曲霉），有的菌丝没有横隔（如毛霉、根霉）。菌丝直径比一般细菌和放线菌菌丝大几倍到几十倍。菌落形态较大，质地疏松，颜色各异，有丝状、绒毛状或蜘蛛网状的菌丝体。将菌丝体放在水中易变形，将其置于乳酸石炭酸溶液中，保持菌丝体原形。几类酵母的菌落形态16一些鉴别培养基来源于不同微生物的抗生素放线菌产生链霉素、红霉素、四环素、利福霉素庆大霉素、麦迪霉素、林可霉素等真菌产生青霉素、头孢菌素C等细菌产生多粘菌素、杆菌肽等目前已筛选出抗生素达9000种以上，每年还新增百余种。投入生产的仅百余种。CurrentMethodsofIdentificationBIOLOG自动微生物鉴定系统检测原理鉴定步骤TheBacterialIdentificationProcessTheFungiIdentificationProcess挑取菌落BIOLOG常用消耗品微生物鉴定（95种碳源）2930ElectronmicrographofstrainZJB-05174cells分子遗传学鉴定GenomicDNAextractionPrimersdesign16S/18SrDNAsequenceamplificationDenaturingGradientGelElectrophoresis(DGGE)DNAsequencingmachinesusefluorescentdideoxynucleotides37383940414243微生物菌种保藏及其专利申请国际承认用于专利程序的微生物保藏布达佩斯条约我国专利法还应办理下列手续47对基因的占有方式是“基因专利”基因专利的商业价值基因药靶的价值基因专利的法律效力生物技术专利战略54定义菌种保藏—是指在广泛收集实验室和生产菌种、菌株的基础上，将它们妥善保藏，使之达到不死、不衰、不污染以便于研究、交换和使用的目的。菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通过保持培养基营养成分在最低水平，缺氧状态，干燥和低温，使菌种处于“休眠”状态，抑制其繁殖能力。一种好的保藏方法，首先应能长期保持菌种原有的优良性状不变。菌种保藏的方法很多，一般有下面几种：A斜面冰箱保藏法斜面保藏是一种短期、过渡的保藏方法，用新鲜斜面接种后，置最适条件下培养到菌体或孢子生长丰满后，放在4℃冰箱保存。一般保存期为三个月到六个月。B沙土管保藏法这是国内常采用的一种方法。适合于产孢子或芽孢的微生物。制备方法：首先，将沙与土洗净烘干过筛后，按沙与土的比例为l－2∶l混合均匀，分装于小试管中，装料高度约为1厘米左右，121°C间歇灭菌三次，灭菌试验合格后烘干备用。一般沙用80目过筛，土用30－100目过筛。其次，将斜面孢子制成孢子悬浮液接入沙土管中或将斜面孢子刮下直接与沙土混合，于干燥器中用真空泵抽干，放在冰箱内保存。一般保存期为1年左右。C、石蜡油封存法向培养成熟的菌种斜面上，倒入一层灭过菌的石蜡油，用量要高出斜面一厘米，然后保存在冰箱中。此法可通用于不能利用石蜡油作碳源的细菌、霉菌、酵母等微生物的保存。保存期约一年左右。D、真空冷冻干燥保减法真空冷冻干燥保藏法是目前常用的较理想的一种方法。其基本原理是在较低的温度下（－15℃），快速将细胞冻结，并且保持细胞完整，然后在真空中使水分升华。在这样的环境中，微生物的生长和代谢都暂时停止，不易发生变异。因此，菌种可以保存很长时间，一般5年左右。这种保藏方法虽然需要一定的设备，要求亦比较严格，但由于该方法保藏效果好，对各种微生物都适用。所以，国内外都已较普遍地应用。这种方法的基本操作过程是先将微生物制成悬浮液，再与保护剂混合，然后放在特制的安瓶管内，用低温酒精或干冰，使其迅速冻结，在低温下用真空泵抽干，最后将安瓿管真空熔封，并低温保藏。保护剂一般采用脱脂牛奶或血清。保护剂的作用可能是在冷冻干燥的脱水过程中代替结合水而稳定细胞成分（细胞膜）的构型，防此细胞膜因为冻结而破坏。保护剂还可以起支持作用，使微生物疏松地固定在上面。牛奶可以离心或加热的方法脱脂。E液氮超低温保藏法国外较普遍采用，是适用范围最广的微生物保藏法。尤其是一些不产孢子的菌丝体，用其它保藏方法不理想，可用液氮保臧法。其保存期最长。a原理用