实验一普通光学显微镜的结构和使用方法专业知识讲座.ppt
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一、实验目的和要求二、实验内容三、相关知识与实验原理显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同,可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光(紫外线显微镜以紫外光)为光源,后者则以电子束为光源。1.光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成:①照明系统:包括光源和聚光器。②光学放大系统:由物镜和目镜组成,是显微镜的主体。③机械装置:用于固定材料和观察方便,包括镜台(载物台)、调节器和、物镜转换器(旋转器)等。普通光学显微镜的构造2.荧光显微镜3.激光共聚焦扫描显微镜4.暗视野显微镜darkfieldmicroscope把透过标本的可见光的光程差变成振幅差,从而提高了各种结构间的对比度,使各种结构变得清晰可见。在构造上,相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。环形光阑(annulardiaphragm):位于光源与聚光器之间。相位板(annularphaseplate):物镜中加了涂有氟化镁的相位板,可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。Fourtypesoflightmicroscope●Bright-fieldmicroscope:theimageobtainedbythesimpletransmissionoflightthroughacellinculture●Dark-fieldmicroscope:thecellappearsasabrightobjectagainstadarkbackground●Phase-contrastmicroscope:visualizinglivingcells●Differential-interference-contrastmicroscope:visualizinglivingcells普通光学显微镜的基本结构组成普通光学显微镜基本构造光学显微镜基本结构:1.照明灯(Lamp)2.聚光器(Condenser)3.载物台和切片夹(Mechanicalstageandspecimenretainer)4.推进器(Mechanicalstageadjustmentknob)5.物镜(Objectives)6.粗细螺旋(Courseandfinefocusknob)7.目镜(Oculars)8.照相机等接口(Connectiontocamera,etc.)1.物镜物镜(objective)是光学显微镜成像系统中决定其分辨率或叫分辨本领的最关键部件。2.目镜目镜的作用是把物镜放大的实象再放大一级,并把物象映入观察者的眼中,实质上目镜就是一个放大镜。显微镜的分辨率能力是由物镜的数值孔径所决定的,而目镜只是起放大作用。对于物镜不能分辨出的结构,目镜放的再大,也仍然不能分辨出。3.聚光镜聚光镜装在载物台的下方。小型的显微镜往往无聚光镜,在使用数值孔径0.40以上的物镜时,则必须具有聚光镜。聚光镜不仅可以弥补光量的不足和适当改变从光源射来的光的性质,而且将光线聚焦于被检物体上,以得到最好的照明效果。显微镜的光学原理显微镜的放大倍数四、实验器材五、实验方法和步骤2.观察前的准备工作(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯,观察时要双眼同时睁开,一边观察一边进行记录或描绘。(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。(3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整和正常,并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。3.低倍镜的操作置显微镜于固定的桌上,接通电源,打开光源。将标本片放在载物台上,用标本夹夹住,调节标本移动螺旋,使观察的目的物处于物镜的正下方。调节粗调螺旋,使物镜(10×)与标本靠近,眼睛在测向注视物镜,防止物镜和载玻片相碰。张开双眼向物镜里观察,如果见到目的物,但不十分清楚,可用细准焦螺旋,至目的物清晰为止。通过玻片夹推进器慢慢移动玻片,认真观察标本各部分,找到合适的目的物,仔细观察并记录所观察到的结果。4.高倍镜的操作使用高倍镜前,必须先用低倍镜观察,发现目的物后将它移至视野正中处。旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动,这说明原来低倍镜并没有调准,目的物并没有真正找到,必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊,调节细准焦螺旋,直到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系,防止镜头与载玻片强力接触,损坏镜头或载玻片。5.油镜的操作如果用高倍镜目的物未能看清,可用油镜。先用低倍镜和高倍镜检查标本片,将目的物移到视野正中。在载玻片上滴一滴香柏油,将油镜移至正中,缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸没在油中,刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋微微向上调(切忌不用粗准焦螺旋)即可。油镜观察完毕,用油镜纸将镜头上的油揩