stathminsiRNA表达载体对MCF-7细胞生物学行为的影响的任务书任务书题目名称：stathminsiRNA表达载体对MCF-7细胞生物学行为的影响任务背景：乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，影响着全球数以百万计的女性。虽然治疗手段有较大进步，但其治疗效果仍不理想。因此，寻找乳腺癌分子靶点能有效地预防和治疗乳腺癌具有一定的研究意义。Stathmin是一种蛋白质，广泛存在于所有组织和细胞中。它被上调并在癌症中高表达。它与细胞微管蛋白结合并调节细胞微管的动态性，参与细胞增殖、分化、凋亡等生物过程。因此，研究Stathmin可能成为乳腺癌治疗的重要靶点。siRNA技术是最近几年发展起来的一种RNA干扰技术。由于siRNA可精准地靶向特定的基因并迅速降低其表达，从而有效地抑制基因的功能。将Stathmin靶向下调后，乳腺癌细胞的生物学行为会发生变化。本研究旨在探讨stathminsiRNA表达载体对MCF-7细胞生物学行为的影响。任务内容：1.制备stathminsiRNA并测序验证，确定stathminsiRNA表达载体的构建方案2.将构建好的stathminsiRNA表达载体导入MCF-7细胞，检测表达水平3.观察、比较相应的对照组和实验组细胞的生长曲线、增殖率、胞周期、凋亡率、迁移率等指标4.通过Westernblot等方法，检测与Stathmin相关的蛋白质表达的变化任务目标：1.成功构建stathminsiRNA表达载体并通过测序验证2.成功导入MCF-7细胞中，能够有效地降低stathmin表达水平3.获得实验组和对照组细胞的生长曲线、增殖率、胞周期、凋亡率、迁移率等指标，并比较其差异4.检测与Stathmin相关的蛋白质表达的变化，探讨Stathmin在乳腺癌中的作用任务方法：1.从文献中寻找、挑选siRNA序列，合成对应的siRNA2.将siRNA序列亚克隆到质粒载体中3.使用质粒载体转染细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测敲低效果4.细胞生物学实验，包括MTT、流式细胞仪检测细胞增殖、胞周期、凋亡率、划痕实验等5.使用Westernblot等方法检测相关蛋白质的表达变化任务时间：开始时间：2021年7月结束时间：2022年7月参考文献：1.ArchettiM,GandolfiA,BrugnatelliS,etal.Stathmin1:anoveltherapeutictargetforcanineatherosclerosis.Scientificreports,2021,11(1):1637.2.LiC,XuS,ZhangH,etal.Stathmindeficiencysuppressesgrowthandmetastasisofgastriccancercellsviaskewingmacrophagephenotypetopro-inflammatoryM1type.Journalofcellularphysiology,2021.3.TrincavelliML,DanieleS,CiapparelliA,etal.Currentadvancesinstathmingeneexpressionregulation.InternationalJournalofBiochemistry&CellBiology,2020,121:105700.