HPPCn相互作用的膜蛋白筛选的中期报告本项目旨在利用膜蛋白筛选系统筛选HPPCn（高度保守的人类磷脂酰肌醇3-激酶C绑定蛋白）与其相互作用的膜蛋白。在项目进行的前期，我们完成了以下工作：1.HPPCn的原核表达与纯化：利用大肠杆菌表达HPPCn蛋白并进行亲和柱纯化得到高纯度的HPPCn。2.膜蛋白库的构建：通过采集人类肝和肺等组织的mRNA，利用reversetranscription-polymerasechainreaction（RT-PCR）扩增膜蛋白基因，并将其插入pDONR221载体，最终构建了包含260个膜蛋白基因的膜蛋白库。3.膜蛋白筛选系统的建立：利用Gateway技术将膜蛋白库中的基因克隆到表达载体pDEST-N-Flag之中，获得pDEST-N-Flag-membraneprotein的表达载体。该载体可以实现细胞膜定位、Flag标记以及His标记等功能。在完成上述工作后，我们开始进行膜蛋白筛选的实验。初步实验结果表明，我们成功地筛选到了两个HPPCn的潜在结合蛋白。我们将进一步进行验证以确定这些潜在结合蛋白是否能够与HPPCn发生特异性相互作用，并进一步揭示HPPCn的生物学功能。