研发部岗前培训牛血清细胞培养技术中文名称：胎牛血清英文名称：fetalcalfserum定义：采自胎牛的血清。含有多种生长因子，常用于体外细胞培养。血清的主要成分功能胎牛血清与小牛血清不同点3、最为重要的一点是：胎牛本身生活在一个洁净环境当中，其血清与外界隔绝，只要生产工艺科学规范，其质量肯定要比后两者好。4、根据牛出生时间和血清采制分离方法分为：（1）胎牛血清：八月龄胎牛心脏穿刺取血;（2）新生牛血清：出生12-24小时新生牛静脉采血;又可细分为：a.高级新生牛血清：采血后静置自然析出的血清;b.标准新生牛血清：c.经离心分离的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清;（3）小牛血清：出生三月龄小牛动脉采血分离血清;血清是血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。一、细胞培养(cellculture)的定义INVITRO:（离体的，即在容器中）用培养细胞进行的实验INVIVO:（在体的）完整机体内进行的实验二、细胞培养的优点与不足（一）优点：便于使用各种技术：相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、组织化学、同位素标记等易于使用物理、化学和生物因素等进行研究提供大量生物性状相似的实验对象，更经济（二）不足：三、培养细胞的形态分类（一）贴附型（二）悬浮型（三）细胞冻存与复苏五、培养细胞的生存环境（一）无污染环境（二）温度四、细胞培养的基本技术（一）细胞分离与原代培养细胞分离与原代培养（二）细胞的传代（secondaryculture）细胞系（cellline）：在细胞培养中产生了具有无限增殖能力的变种细胞，这种细胞可被无限的传代常见的细胞系：NIH3T3细胞系：取自小鼠胚胎细胞建立(1963年)Hela细胞系：取自人宫颈癌细胞建立(1952年)贴附型细胞的生长过程游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态。也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形10分钟～4小时贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束。细胞株平均在10分钟～4小时贴壁底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基团）细胞贴壁过程细胞贴壁过程潜伏期：此时细胞有生长活动，但是无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂机制：接触抑制、密度依赖性细胞的生长过程（三）气体环境与pH值（四）体外培养细胞生存所需基本物质2.氨基酸3.促生长因子4.其它物质（五）渗透压（六）培养基（七）附着底物（3）微载体：由聚苯乙烯和聚丙烯酰胺制成的小球体，附着面大，利于大量繁殖细胞（4）饲细胞（FeederCells）：也称滋养细胞，如用成纤维细胞长成单层后，大剂量射线照射，细胞失去增殖能力但尚存活并有代谢活动；再将其它细胞接种于其上。饲细胞的代谢产物利于其它细胞生长（八）抑制细胞生长因素六、细胞培养的设施与基本条件压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广电热干燥箱：干热消毒（160℃，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒滤器：过滤除菌，大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌超净工作台：为细胞操作提供无菌环境紫外灯：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒超净台CO2培养箱纯水仪七、器械八、培养器皿（一）玻璃瓶皿（二）塑料瓶皿九、培养基（液）天然培养基：天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）优点：营养成分丰富，培养效果好缺点：来源受限。成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染合成培养基:合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM等合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质优点：标准化生产，组分和含量相对固定。成本低缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外