1.2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序：一：目的基因的获取获取目的基因的方法：1.什么叫基因文库？将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因组文库：用限制酶切割一种生物的全部DNA，可以得到大量的DNA片段，然后将这些DNA片段与载体连接，再转化到细菌中去，让受体菌不停分裂。这样，每个受体菌包含有特定的基因组DNA片段，整个受体菌群体就包含这种生物的全部基因称为基因组文库。2、部分基因文库：基因组文库的构建模式图基因组DNA文库cDNA文库和基因组文库的比较①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。真核细胞的基因结构如何从基因文库中得到所需要的基因？（1）从基因组文库中获取：以目的基因转录成的信使RNA为模板，再反转录酶的催化下反转录成互补的单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA，即cDNA，从而获得所需的基因。（3）根据已知的氨基酸序列人工合成DNA法：上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？4.利用PCR技术扩增目的基因利用PCR技术扩增目的基因TaqDNA聚合酶（thermusaquaticus)PCR的基本反应步骤变性：加热至90～95℃双链DNA解链成为单链DNA复性：冷却至55～60℃部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合延伸：加热至70～75℃以目的基因为模板，合成互补的新DNA链①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术。PCR技术扩增与DNA复制的比较人工合成从基因文库中获取利用PCR技术扩增利用化学方法人工合成用一定的_____切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。用_____________切断目的基因，使其产生_________________。2.构建基因表达载体的目的（1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并可以遗传给下一代；（2）使目的基因能够表达和发挥作用。科学家在培育抗虫棉时，经历了多次失败，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？（P15）（1）生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达；3.基因表达载体的组成：思考1：表达载体为什么一定要有启动子？思考2：终止子的作用是什么？终止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。基因工程技术路线三、将目的基因导入受体细胞（二）方法1.将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌转化法③转化过程:基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。（3）花粉通道法胚珠2.将目的基因导入动物细胞（2）操作程序:常用法：Ca2+处理导入导入受体生物四、目的基因的检测与鉴定1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因基因探针：是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列。基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。DNA分子杂交示意图（二）鉴定（个体生物学水平）若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。鉴定——类型提示：①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交；②抗原－抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。归纳:基因工程的基本操作程序为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理,你能分析出农杆菌不能将目的基因不能导入单子叶植物的原因吗?若将一个抗病基因导入小麦中,理论上讲你应该怎样做?4.β-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如让你用基因工程的方法，使大