Westernblot实验技术详细版讲义.ppt
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Westernblot实验技术详细版定义:WesternBlot基本原理WesternBlot一般流程蛋白样品的制备裂解液SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺SDS配胶的Tris缓冲液TEMED过硫酸铵(时间)Tris-甘氨酸电泳缓冲液凝胶浓度与蛋白分离范围安装玻璃板转膜转膜不能有气泡不要污染膜的表面注意正负极冰浴冷却半干转封闭一抗、二抗孵育二抗与底物反应显色WesternBlot常见问题分析SDS-PAGE电泳条带比正常的窄?“微笑”或“倒微笑”条带?转膜及抗体检测背景太高没有阳性条带或比较弱弥散性条带或非特异性条带EnjoyExperiment,EnjoyLife