氨苄西林与红霉素联用的体外抑菌实验研究【摘要】目的：研究繁殖期杀菌剂和抑菌剂联用的可能性，降低细菌内毒素的释放量，改善临床感染症状。方法:采用微生物井式扩散法，在无菌条件下，用藤黄八叠球菌作菌悬液，氨苄西林、红霉素标准品为模型药物，测定两者合用后的抑菌圈。结果:两种抗生素联用后的抑菌圈与氨苄西林单用的抑菌圈相当。结论:抑菌剂与繁殖期杀菌剂联用并不降低繁殖期杀菌剂的杀菌效能，联用时应以同时合用或杀菌剂后使用抑菌剂为宜。【关键词】氨苄西林，红霉素，抑菌圈，藤黄八叠球菌繁殖期杀菌剂在杀灭细菌的同时会引起内毒素大量释放，导致临床症状加剧［1］。繁殖期杀菌剂和抑菌剂联用历来被认为是抗生素的不合理用药［2］，原因是抑菌剂抑制细菌的生长无法使繁殖期杀菌剂起到杀菌作用，从而使联用失去意义。繁殖期杀菌剂主要是β内酰胺类抗生素，包括青霉素类和头孢菌素类，发挥抗菌作用时与细胞外膜上的青霉素结合蛋白结合，细胞壁合成受阻，最后细菌破裂死亡。抑菌剂主要是大环内酯类，其抗菌机制是抑制细菌蛋白质合成致细菌死亡。到目前为止，尚未见有实验研究证明繁殖期杀菌剂和抑菌剂联用不合理。1材料氨苄西林标准品，红霉素标准品，10μL微量进样器，隔水式电热恒温培养箱，藤黄八叠球菌。2方法Ⅱ号培养基及灭菌缓冲液的制备［3］菌悬液的制备［4］取已分离出的单个菌落接种于试管斜面上，在30℃恒温箱培养24h。取上述菌种，分别接种于2个扁瓶斜面上，置30℃恒温箱培养，一斜面培养24h，摇匀后趁热吸取18mL注入水平台上的玻璃培养皿中，待冷凝后用角膜环钻在同一圆周上打若干个孔,孔距适当,倒置备用。标准溶液的制备精密称取标准品适量，用灭菌水溶解制备贮备液。实验方法［5］无菌条件下在菌碟孔中分别点样，点样量为10μL，平行实验菌碟为6个，置恒温箱中培养16～18h后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径。氨苄西林与红霉素联用对生长期相同细菌的影响依“”、“”制备两种细菌悬液和菌碟，每碟打四个孔，分别注入10μL灭菌水、2μg/mL红霉素、μg/mL氨苄西林及混合液，依“”法试验。不同浓度红霉素对氨苄西林杀菌效果的影响依“”、“”制备两种细菌悬液和菌碟，每碟打六个孔，适当稀释使含氨苄西林均为μg/mL，红霉素分别、、、μg/mL，依“”法试验。氨苄西林与红霉素联用方式对氨苄西林杀菌效果的影响依“”、“”制备两种细菌悬液和菌碟，每碟打六个孔，从1～6依次编号，分别注入10μL灭菌水、2μg/mL红霉素、μg/mL氨苄西林、混合液、μg/mL氨苄西林、2μg/mL红霉素，置恒温箱中培养6h后，在5、6号孔中分别再注入10μL2μg/mL红霉素、μg/mL氨苄西林后，继续培养至16～18h后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径。氨苄西林与红霉素联用对放置不同时间细菌悬液的影响将细菌悬液分别在4℃冰箱中放置0d、3d、7d后，分别依“”法试验。3结果氨苄西林与红霉素联用对生长期相同细菌的影响结果见表1。由表1可知繁殖期杀菌剂氨苄西林与生长期抑菌剂红霉素混合溶液的抑菌圈与氨苄西林单独使用时的抑菌圈比较差异无统计学意义，两者联用不论在细菌生长期是否一致都与单独使用的杀菌效力相当。表1氨苄西林与红霉素单用、联用后的抑菌圈直径不同浓度红霉素对氨苄西林杀菌效果的影响结果见表2。由表2可知，合用不同浓度的红霉素对氨苄西林的杀菌效果影响不同，浓度小于1μg/mL时，抑菌圈略大，浓度大于1μg/mL时，抑菌圈相近，但差异均无统计学意义。表2不同浓度红霉素与氨苄西林联用的抑菌圈直径氨苄西林与红霉素联用方式对氨苄西林杀菌效果的影响结果见表3。由表3可知，红霉素与氨苄西林的合用方式不同，效果也不同。同时合用或先用氨苄西林后用红霉素效果相近，差异无统计学意义。表3氨苄西林与红霉素不同联用方式的抑药圈直径注：*表示与μg/mL氨苄西林组比较差异有统计学意义氨苄西林与红霉素联用对放置不同时间细菌悬液的影响由表4可知，细菌悬液放置7d对实验结果几无影响且细菌生长期相同与否对实验结果也无影响，但7d时t值小于3d时t值，故细菌悬液放置时间不宜超过3d。表4氨苄西林与红霉素放置不同时间的抑菌圈直径注：*表示与μg/mL氨苄西林组比较差异有统计学意义4讨论以往认为，繁殖期杀菌剂和生长期抑菌剂不能联用，但本文体外实验研究结果与传统理论的结论相反，其作用机制及临床验证有待进一步研究。临床感染的情况复杂，细菌往往不处在同一生长状态，繁殖期杀菌剂可以杀灭繁殖期的细菌，抑菌剂可以抑制生长期细菌的繁殖，并且联合应用可降低细菌内毒素的释放量，改善临床症状，从而达到良好的治疗目的。考虑到联用方式对杀菌效果有影响，一旦联用应以同时合用或先使用杀菌剂后使用抑菌剂为宜。【参考文献】［1］徐能武,袁建成,肖光夏,等.β内酰胺类抗生素诱导革兰氏阴性菌释放内毒素对其疗效的