催化布洛芬甲酯选择性水解的抗体酶的研究的中期报告.docx
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催化布洛芬甲酯选择性水解的抗体酶的研究的中期报告本次研究旨在开发一种具有高效选择性的催化剂,以水解布洛芬甲酯(IBU-M)成为布洛芬(IBU)的抗体酶。本中期报告着重介绍了我们在抗体酶筛选和表征阶段所取得的进展。1.抗体酶库构建我们采用广泛存在于自然界中的重链变异抗体(nanobody)和蛋白酶K的融合物(nanobody-K)替代传统的单克隆抗体,并采用基因突变扩增技术随机插入5-10个氨基酸的片段来构建抗体酶库,最终得到了包含数百万个成员的构象多样性抗体酶库。2.抗体酶筛选为了筛选出具有高选择性的抗体酶,我们采用亲和层析法和薄层扫描法来寻找具有IBU-M选择性水解能力的抗体酶。首先,我们通过使用IBU-M偶联的亲和树脂来进行第一轮筛选,并通过洗脱和再结合来确定最终的抗体酶。接下来,我们使用含有IBU和其他物种(如其他药物)的薄层来进行第二轮筛选。通过最终的筛选,我们成功地获得了表现出高IBU-M选择性水解能力的抗体酶。3.抗体酶表征为了进一步评估我们筛选出的抗体酶,我们对其进行了多个方面的表征。利用安化试剂法和荧光谱法,我们确定了抗体酶的催化效率和亲和力。同时,我们还使用小角X射线散射分析(SAXS)和核磁共振结构生物学技术(NMR)来确定其在溶液中的构象和动态性质。结果表明,我们所筛选出来的抗体酶在溶液中以单体和二聚体的形式存在,其构象和动态性质都很好。综上所述,我们在催化IBU-M选择性水解的抗体酶的研究中取得了一定的进展。我们成功构建了一个包含数百万个成员的抗体酶库,并且通过有效的筛选和复选方法,获得了表现出高IBU-M选择性水解能力的抗体酶。未来,我们将继续对其进行优化,以实现更高的选择性和活性。