HPV-58E7基因原核及真核表达载体的构建及哺乳动物细胞模型的建立的中期报告本文所描述的工作旨在构建HPV-58E7基因的原核及真核表达载体，并建立哺乳动物细胞模型，以进一步研究该基因在人体癌症中的作用机制。1.HPV-58E7基因原核表达载体的构建首先，我们将HPV-58E7基因的序列克隆入原核表达载体pET28a(+)中，构建了pET28a(+)-E7质粒。经过序列检测，确保序列正确无误。接下来，将pET28a(+)-E7质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中。利用IPTG诱导蛋白表达，将表达产物通过Ni-NTA亲和柱纯化。通过SDS-PAGE进行分析，我们成功获得了HPV-58E7蛋白的高表达产物，推动了后续建立哺乳动物细胞模型的进程。2.HPV-58E7基因真核表达载体的构建为了建立HPV-58E7基因在哺乳动物细胞中的表达模型，我们构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-E7。首先，将HPV-58E7基因序列克隆入pcDNA3.1(+)质粒中，构建了pcDNA3.1(+)-E7质粒。然后，将质粒转染到293细胞中，经G418筛选获得稳定转染细胞株。为了验证HPV-58E7基因在哺乳动物细胞中的表达效果，我们进行了Westernblot分析。使用Anti-E7抗体检测293细胞株的蛋白样本，结果显示成功检测到了HPV-58E7蛋白。3.哺乳动物细胞模型的建立为了更深入地研究HPV-58E7基因在癌症中的作用机制，我们建立了哺乳动物细胞模型。首先，利用CRISPR-Cas9技术构建出HPV-58E7基因的敲除细胞株，并通过Westernblot验证敲除的效果。接下来，我们将稳定转染的pcDNA3.1(+)-E7质粒插入到HPV-58E7敲除细胞中，从而建立了E7基因的恢复表达模型。通过Westernblot检测，成功检测到E7的表达。综上所述，我们成功地构建了HPV-58E7基因的原核及真核表达载体，建立了哺乳动物细胞模型，为进一步研究该基因在人体癌症中的作用机制奠定了坚实的基础。