小动物疾病防治专业动物组织胚胎学综合性实验犬猫组织切片的制作实验指导李玉谷编华南农业大学兽医学院二零零四年六月犬猫组织切片的制作实验指导李玉谷编写张媛整理李楚宣审校目录概述………………………………………………………………………2实验一动物麻醉与组织取材…………………………………………3实验二组织固定………………………………………………………5实验三组织冲洗与脱水………………………………………………8实验四组织透明、浸蜡与包埋………………………………………11实验五组织切片、贴片与烤片………………………………………14实验六组织切片染色…………………………………………………151概述一、本实验的目的动物组织制片的方法，最主要的和最常用的是石蜡包埋切片法，该方法广泛应用于动物组织学、病理学、生物学等许多学科和临床实践中。石蜡包埋切片法的基本原理，是将石蜡渗入组织内作为支持物，然后用切片机将组织切成薄片，经染色后在显微镜下观察。本综合性实验，要求同学们学会犬、猫组织的石蜡包埋切片，HE染色标本的制作过程。通过该实验，掌握犬、猫组织的取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和HE染色等基本方法和操作技能，为今后临床病理诊断等奠定基础。二、本实验所需的仪器设备光学显微镜、石蜡切片机、组织脱水机、石蜡包埋机、磨刀机、染色机、染色缸、切片架、载玻片、盖玻片、冰箱、恒温箱、干燥箱、天平、酸度计、离心机、定时钟、解剖器械、玻璃器皿，等等。三、本实验所需的主要试剂组织固定剂（10%福尔马林等）、组织脱水剂（酒精等）、组织透明剂（二甲苯等）、组织包埋介质（石蜡等）、染色剂（苏木精、伊红等）、分色剂（1%盐酸酒精等）、封片剂（中性树胶）等。2实验一动物麻醉与组织取材一、动物麻醉猫或狗一只，用3%~4%戊巴比妥钠，按1ml/kgw静脉注射或腹腔注射；或按5ml/kgw腹腔注射20%氨基甲酸乙酯；或按使用说明书注射其他麻醉剂。二、组织取材组织取材是制片的一个重要技术问题，必须根据具体要求，确定取材的部位和方法。否则，对所观察的组织结构，不是看不到，就是看不全。因此，在取材之前，必须弄清所取组织器官的解剖位置、组织结构特点等，同时，还要掌握实际的操作技术，不能随意切取组织器官。（一）取材顺序在麻醉状态下，取下心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、胰、小肠、大脑等主要器官的小块组织，立即置于固定剂中进行固定。一般说来，先取腹腔内的脏器，然后取胸腔、骨盆腔内的脏器，最后开颅取神经系统及其他材料。狗的神经、免疫、内分泌、消化、呼吸、泌尿、生殖系统的材料均较好；猫的神经、内分泌、消化、泌尿系统以及肌肉的材料也较好。（二）取材方法1、心脏（1）部位：左心室乳头肌处。（2）方法：沿乳头肌长轴作纵切。2、肝（1）部位：中部。（2）方法：纵切或横切。（3）大小：2~3mm厚。因肝为实质性器官，细胞排列密集，固定剂难以渗入，故组织块不能过大。3、脾（1）部位：中部。（2）方法：横切。（3）注意：先用生理盐水从脾动脉注入冲洗，同时切开脾静脉，将血液冲出，至脾呈灰白色，然后取材。34、肺（1）部位：中部。（2）方法：横切。（3）注意：先从肺支气管或肺动脉注射适量的固定剂，然后将全肺投入固定剂中固定6~12h后，再取材。5、肾（1）方法：最好先进行灌注固定，而后取材，即从肾动脉注入固定剂，同时切开肾静脉，当血液流尽后，将全肾投入固定剂中固定2~4h后，再沿正中矢面剖开，然后在任一半面上，从皮质向髓质的方向切一扇形组织块，以确保皮质、髓质完全，再投入固定剂继续固定。（2）注意：皮质、髓质一定要完整。6、淋巴结（1）部位：肠系膜淋巴结较好，髂内淋巴结、颈淋巴结也可。（2）方法：沿门部作正中纵切面，分为两半。7、胰（1）部位：以胰尾较好，因为此处胰岛较多。（2）大小：长0.3~0.5cm。8、小肠（1）部位：一般取各段肠管的中部。（2）方法：横切、纵切均可。横切时，可先取一段稍长的肠管，用生理盐水冲去内容物，然后两端结扎，再注入适量固定剂于肠腔内，投入固定剂中预固定4~6h后再取材，长约0.5~1.0cm；纵切时，组织块经生理盐水洗涤后，将外壁贴于滤纸上，然后投入固定剂中固定。9、大脑（1）部位：中央前回或后回。（2）方法：垂直切入。（3）注意：皮质、髓质均切到。（三）取材注意事项1、动作轻柔，避免挤压组织。一般用刀片，少用或不用剪刀，切取时要一刀下去，不要来回拉锯式拖动。