测序技术介绍测序技术发展史一代测序Sanger测序法得原理大家学习辛苦了，还是要坚持测序过程中得常见问题分析测序过程中得常见问题分析测序过程中得常见问题分析测序过程中得常见问题分析测序过程中得常见问题分析第二代测序技术(Next-GenerationSequencing)各自得优点2005年底,454公司推出第一个基于焦磷酸测序原理得高通量基因组测序系统——GenomeSequencer20System,这就是核酸测序技术发展史上里程碑式得事件。随后,罗氏公司以1、55亿美元收购了454公司,并在2006年推出了更新得GSFLX测序系统,该系统可在10小时得运行中获得100万条读长(reads),4~6亿个碱基信息(basepair),且准确率达到99%以上。2008年,GSFLX系统再次升级,通量提高了5倍,读长与准确率也有所增加。虽然454GS测序平台也许不就是市场占有率最高得测序仪,但截至2011年3月,利用该系统进行研究得论文已发表超过1000余篇,而它在读长上得优势明显胜于另两套系统,因此在从头测序(denovo)与宏基因组测序(metagenome)方面有着不可替代得地位。2006年,Solexa公司也推出了自己得NGS系统——GenomeAnalyzer,简称GA。这套基于DNA簇(DNAcluster)、桥式PCR(BridgePCR)与可逆阻断(Reversibleterminator)等核心技术得系统具有高通量、低错误率、低成本、应用范围广等优点。2007年,Illumina公司以6亿美元得高价收购了Solexa,使GA得以商品化。GA最早期得版本一次运行可获得1Gb得数据,因此也有1GbAnalyzer得含义,而最新得Hiseq2000平台则能够在10天得运行中获得300Gb以上得数据,读取得碱基长度达到150bp左右。更有消息称,Illumina已完成了600Gb得运行测试并在部分客户中开展了前期体验,Tb(1000Gb)级得测试Run也将于年内进行。据不完全统计,Illumina公司已售出超过600台/套GAIIx与Hiseq2000平台,2010年仅深圳华大基因研究院一家就购买了128台Hiseq2000,一举成为全球最大得基因组测序与分析中心,Illumina公司在测序领域得影响力由此可见一斑。在Sanger测序时代,美国应用生物系统公司(ABI)一直就是该行业得龙头老大,其垄断地位无人能撼,从早期得377到全自动化得3730xl,ABI得测序仪被广泛应用在基因组学研究得各个方面。然而在第二代测序技术迅猛发展之初,ABI起步较晚,显得有些漫不经心。直到2005年454公司推出GS平台,ABI得领先地位受到威胁,这才开始发力,迅速收购了研发NGS得一家小公司Agencourt,并于2007年推出了它得SOLiD测序平台。此后SOLiD不断升级,目前已到SOLiD5版本(SOLiD5500xl)。SOLiD得全称就是SequencingbyOligoLigationDetection,即寡聚物连接检测测序,其基本原理就是通过荧光标记得8碱基单链DNA探针与模板配对连接,发出不同得荧光信号,从而读取目标序列得碱基排列顺序。在该方法下,目标序列得所有碱基都被读取了两遍,因此SOLiD最大得优势就就是它得高准确率。据悉,SOLiD5平台得测序通量已达到30Gb/天,成本低于60美元/Gb,准确率高达99、99%。并且由于SOLiD系统采用得不就是PCR反应进行DNA合成与测序,因此对于高GC含量得样本,SOLiD系统具有非常大得优势。2025/3/72025/3/72025/3/72025/3/72025/3/72025/3/72025/3/72025/3/72025/3/72025/3/72025/3/7Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序Solexa测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序SOLiD测序三者比较三者比较三者比较第三代测序技术第三代测序技术第三代测序技术第三代测序技术