A群轮状病毒单克隆抗体及免疫胶体金试纸条制备的中期报告一、背景A群轮状病毒（RV-A）是一种颇具传染性和致病性的病毒，主要引起婴幼儿和儿童的急性胃肠炎，病情轻重不一。随着诊断技术的发展，快速检测方法的需求也越来越高。目前市场上已经有RV-A的免疫层析试纸条，但是由于其对RV-A抗原存在重大的交叉反应性，所以使得检测结果存在误差。单克隆抗体是指由单个B淋巴细胞克隆扩增而获得的同种型多个抗体分子，具有高度的特异性和亲和力。免疫胶体金试纸条则依靠单克隆抗体的高特异性，可以检测非常低浓度的分子，同时具有操作简便、结果直观等优势。因此，开发一种高特异性的RV-A单克隆抗体及免疫胶体金试纸条，可以提高RV-A检测的准确性和稳定性，具有重要的临床应用价值。二、进展1.RV-A抗原的制备以人肠道上皮细胞系HT-29为基础细胞，在无菌条件下进行培养、扩增，采用冻干法制备RV-A抗原。已经完成了抗原制备的初步检测和鉴定。2.单克隆抗体的制备取免疫鼠（ICR系，雌，2~3周龄）颈部皮下注射1×1010pfu/mL的RV-A抗原，间隔2周注射2次，第四周注射1次，采集其脾脏进行细胞融合。已经成功获得1株RV-A单克隆抗体细胞株，并进行了鉴定。3.免疫胶体金试纸条的制备在选择的RV-A单克隆抗体中，筛选出具有高特异性的一株，进行抗体标记和免疫层析试纸条制备。试纸条制备中，采用卡蓝作为固相，goatanti-mouseIgG作为检测线，兔抗鼠IgG作为对照线。4.测试方法的优化经过初步测试，免疫胶体金试纸条具有良好的特异性和灵敏度。目前正在优化测试方法，希望达到更高的准确性和稳定性。三、未来研究方向1.进一步优化免疫胶体金试纸条的性能，使其更精准、更稳定。2.开展RV-A单克隆抗体检测试剂盒的组装与包装，推进其产品化的进程。3.扩大RV-A单克隆抗体在临床应用中的范围，为临床诊断和治疗提供更多有效的手段。