细胞(xìbāo)凋亡（科普诗）细胞凋亡(diāowánɡ)（科普诗）危难中的细胞啊，你沉稳不乱，DNA片片切割，化云梯(yúntī)直通天堂；细胞体分团相聚，把生命的凝重浓集在小体上；分别了朝夕相处的伙伴，再见了快乐美好的时光；这一切的一切又融入临近的胞体，腾出的空间再写生命的篇章。细胞死亡(sǐwáng)形式/坏死凋亡细胞凋亡的生理(shēnglǐ)和病理意义细胞(xìbāo)凋亡与疾病发生机制的新认识细胞凋亡(diāowánɡ)的过程凋亡过程(guòchéng)及分期诱导期执行期消亡期凋亡(diāowánɡ)时细胞的主要变化胸腺细胞(xìbāo)胸腺细胞(xìbāo)细胞凋亡的生化(shēnɡhuà)改变1.DNA的片段(piànduàn)化“梯”状条带为细胞凋亡主要特征/2.内源性核酸(hésuān)内切酶激活及其作用3.Caspase9激活，需要通过CARD（caspase-recruitmentdomain)、Apaf-1、细胞(xìbāo)色素c、ATP等多个因子的参与细胞(xìbāo)凋亡的调控1.细胞(xìbāo)凋亡的诱导因素2.细胞(xìbāo)凋亡的抑制因素(二)细胞凋亡(diāowánɡ)信号的转导-凋亡(diāowánɡ)信号转导系统特点㈡细胞凋亡(diāowánɡ)信号的转导㈢细胞(xìbāo)凋亡相关基因Bcl-2抗凋亡(diāowánɡ)机制细胞(xìbāo)凋亡发生机制（一）氧化损伤(sǔnshāng)机制（二）钙稳态失衡引起细胞凋亡(diāowánɡ)的可能机制细胞(xìbāo)凋亡的生物学意义/细胞凋亡(diāowánɡ)的检测一．细胞(xìbāo)凋亡的形态学分析细胞凋亡(diāowánɡ)的形态学检测方法二.DNA降解(jiànɡjiě)分析(二)原位标记法TUNEL(TdTmediateddUTPnickendlabeling)终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记技术。原理：在TdT的作用下，带有标记物的dUTP被连接在断裂DNA3’末端，然后(ránhòu)通过相应的方法检测标记物，从而判断是否有凋亡发生。应用范围：石蜡包埋的组织切片、冰冻组织切片、培养细胞、组织中分离的细胞(三)ELISA法原理：以抗组蛋白抗体包被微孔(wēikǒnɡ)板壁，加入标本，凋亡细胞的核小体可与抗体结合，再加入抗-DNA片断-POD复合物，与核小体中的DNA片断结合，最后加入POD显色底物，以酶标仪测定光密度以进行定量分析。三.凋亡(diāowánɡ)酶学分析Caspases的检测1.Caspase-3活性测定(FIENA法)荧光测定免疫吸附法(flurometricimmunosorbentenzymeassay,FIENA),caspase-3可作用于连接荧光素的特异底物－乙酰化天冬氨酸-谷氨酸-颉氨酸-天冬氨酰胺(Ac-DEVD),产生发荧光的裂解产物AFC，且caspase-3活性与Ac-DEVD-AFC分解(fēnjiě)的量或自由荧光AFC产生荧光的强弱成正比，故可定量检测2.蛋白印迹法Caspases作用底物的检测PARP89kD的检测四.凋亡(diāowánɡ)相关蛋白分析五、流式细胞分析(fēnxī)FCM分析(fēnxī)细胞凋亡的方法感谢您的观看(guānkàn)！