三叶草属三种植物遗传多样性的RAPD分析的中期报告本研究旨在利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对三叶草属三种不同植物的遗传多样性进行分析。三种植物分别为TrifoliumrepensL.（白车轴草）、TrifoliumpratenseL.（紫苜蓿）和TrifoliumincarnatumL.（赤苜蓿）。本研究的中期报告如下：1.样本收集与DNA提取共采集了来自不同地区的30个三叶草属植物样本，其中每种植物各10个。样本的新鲜叶片组织经过冰冻保存和粉碎后，采用CTAB法提取总DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳进行DNA的纯化和分离。2.RAPD扩增反应条件的优化通过对PCR电容量、扩增温度、Mg2+浓度、引物浓度等PCR反应条件的优化，最终确定了适宜的反应体系为：25μlPCR反应体系含有2.5μl10×PCR缓冲液，1.5mmol/L的Mg2+，0.1mmol/L的dNTPs，0.2μmol/L的引物，2.5UTaqDNA聚合酶和100ng的DNA模板。3.RAPD扩增反应的结果分析在本研究中，我们使用了10对引物进行了RAPD扩增反应，产生了明显的多少多态性DNA条带。通过对不同植物的RAPD衍生成果的比较，我们发现：a）不同引物扩增产生的DNA条带数目不同；b）不同植物之间的RAPD扩增结果差异显著；c）同一种植物内不同个体之间的RAPD扩增结果差异也显著。4.遗传多样性分析通过对不同引物扩增结果的分析，我们计算了Shannon多样性指数和Nei基因多样性指数，并绘制了聚类图和主坐标图。结果显示三种植物内部遗传多样性较高，不同植物之间的遗传差异显著。综上，本研究初步分析了三叶草属三种植物的RAPD扩增反应结果，并在此基础上计算了遗传多样性指数，结果表明三种植物内部遗传多样性丰富，不同物种之间的遗传差异较大。下一步，我们将扩大样本量和引物筛选，进一步研究三叶草属植物的遗传多样性和遗传进化。