比较雷米普利与卡托普利对糖尿病大鼠心肌间质重构的影响【摘要】目的：通过观察雷米普利与卡托普利对糖尿病大鼠心脏指数、心肌局部血管紧张素Ⅱ、Caspase3蛋白阳性染色指数、心肌细胞凋亡指数的影响，探讨两者对糖尿病大鼠心肌病的可能保护机制。方法：40只健康雄性SD大鼠随机分为10只正常对照组和30只糖尿病组，糖尿病组用链脲佐菌素注射建模，成功后随机分为糖尿病未治疗组、雷米普利治疗组和卡托普利治疗组，每组10只。治疗组按药品说明书的推荐以雷米普利/()水溶液灌胃，卡托普利50mg/水溶液灌胃，正常对照组和糖尿病对照组每天以同等体积生理盐水灌胃。给药9周后，麻醉处死动物，放射免疫法测定心肌局部AngⅡ的含量，ABC免疫组化法检测Caspase3蛋白阳性染色指数，免疫组化法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结果：与正常对照组相比，糖尿病对照组与治疗组心脏指数均增大，AngⅡ含量显着升高,心肌细胞凋亡指数明显增高,Caspase3蛋白阳性染色指数也增高；用雷米普利和卡托普利治疗后，上述指标均有显着改善，雷米普利组较卡托普利组心脏指数、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量改善不明显,其余指标两组比较没有统计学差别。结论：糖尿病心肌病中心肌间质有重构现象发生，雷米普利与卡托普利均可以通过降低AngⅡ、Caspase3阳性蛋白指数来改善心脏的功能，而且两组相比稍有差别。【关键词】糖尿病心肌病；间质重构；雷米普利；卡托普利；AngⅡ；Caspase3糖尿病心肌病这个观点已经得到实验的证实，但对于糖尿病心肌病的发生发展机制并不完全明了。本研究使用非降糖药血管紧张素转换酶抑制剂雷米普利、卡托普利对糖尿病性心肌病进行干预，比较两药对糖尿病心肌病心肌间质的保护作用，为临床治疗提供理论依据。1材料与方法材料主要试剂链脲佐菌素(STZ)为美国Sigma公司产品，免疫组化抗体购自晶美生物技术公司,AngⅡ放射免疫分析试剂盒购自北京北方生物技术研究所。动物分组健康雄性SD大鼠36只，体重210～250g,平均g,购自武汉大学动物实验中心。随机分为正常对照组和糖尿病组，喂养一周后，糖尿病组禁食10h,一次性腹腔注射STZ(用枸橼酸钠缓冲液溶解，pH=4．5)50mg/kg，正常对照组注射同等剂量的枸橼酸钠缓冲液，72小时断尾后测血糖值及尿糖定性，尿糖定性≥+++，空腹血糖持续3天≥／L(250mg／d1)，动物进食、进水、尿量增加，为糖尿病大鼠模型。然后再随机分为糖尿病对照组、雷米普利治疗组、卡托普利治疗组，每组9只，4组大鼠继续以原饲料喂养8周，每周测空腹血糖一次，监测血糖的变化。方法取材禁食10h,每只动物称取体重后,乙醚麻醉,解剖后迅速取出心脏,称心脏(HW)和左心室(含室间隔LVW)重量。以HW/BW为心脏指数,取部分左室心肌组织甲醛固定，免疫组化法测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。放射免疫法检测AngⅡ含量取新鲜标本100mg,采用AngⅡ放射免疫试剂盒，按照说明测定AngⅡ的含量。心肌组织免疫组织化学检测用于Ⅰ型、Ⅲ型胶原的检测。采用石蜡切片,切片厚4μm抗原染色,按染色试剂说明书进行操作,于显微镜下观察。每张切片随机选取5个视野,采用高清晰彩色图文报告分析系统分析,以5个光密度值(OD值)的平均值作为各标本的蛋白表达。原位心肌细胞凋亡的检测左心室前壁心肌常规制作组织切片，每张玻片上摊5个组织片，然后按原位细胞凋亡试剂盒的说明，检测凋亡细胞切片。常规二甲苯脱蜡、下行梯度酒精脱水，蛋白酶K消化，37℃湿盒内孵育，PBS洗3次，37℃湿盒内4%小牛血清封阻非特异性反应，滴加POD置37℃湿盒内孵育，PBS洗3次，DAB染色，自来水终止反应，苏木精复染，脱水、透明、封片。凋亡细胞阳性指数：根据凋亡阳性细胞的分布情况，每张切片于光镜下随机选择5个无重叠视野，每视野计数300个心肌细胞中的阳性细胞核数，以平均计数阳性细胞核数所占的百分比作为凋亡细胞阳性指数(apoptosisindex,AI)。Caspase3阳性蛋白表达率检测石蜡包埋切片后按ABC试剂盒说明书操作。免疫组化染色胞浆或胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，以平均计数阳性细胞核数所占的百分比作为caspases3阳性蛋白表达率。统计学分析各参数均以±s表示,采用SPSS13.0统计软件,组间参数比较采用方差分析，规定说明差异有统计学意义。2结果27只糖尿病大鼠均建模成功，实验过程中糖尿病大鼠与正常对照组相比，活动明显减少，多饮、多尿、多食，血糖值稳定。实验过程中因感染，糖尿病对照组、雷米普利组各死亡1只。死亡动物未纳入统计学分析。4组大鼠心脏指数、体重、胶原含量的比较与正常对照组相比，糖尿病未治疗组、雷米普利组、卡托普利组试验结束时体重明显减轻,Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达增多,说明存在心肌间质重构。糖尿病未治疗组、雷米普利组心脏指数升