三黄鸡CD4胞外区基因的克隆表达及其多抗的制备的开题报告一、背景和研究意义三黄鸡，是一种中国本土土鸡品种，具有生长快、产蛋多、适应性强等优点，因此在农业生产中得到了广泛应用。CD4是一种重要的免疫细胞表面膜受体，对机体的免疫调节起着重要作用。前人研究发现，CD4胞外区基因的多态性与机体的免疫应答有关，因此对CD4胞外区基因的研究在深入理解鸡的免疫机制、筛选强免疫应答群体等方面具有重要意义。二、研究内容和方法本研究旨在从三黄鸡中克隆CD4胞外区基因，并制备多抗以进一步研究其生物学功能。具体研究内容和方法如下：1.从三黄鸡中提取总RNA，反转录合成cDNA。设计CD4胞外区的特异性引物，PCR扩增CD4胞外区基因的全长序列。2.将扩增得到的CD4胞外区基因的全长序列克隆到表达载体pET-32a(+)中，构建原核表达载体。转柿霜菌表达CD4胞外区基因，并通过Ni-NTA柱纯化得到目的蛋白。3.等量混合目的蛋白与Freund's完全佐剂，免疫BALB/c小鼠，观察小鼠的免疫应答情况。分别在第0、14、21、28天采集小鼠血清，制备CD4胞外区基因的多抗。4.对制备的多抗进行纯化和鉴定，检测多抗对CD4胞外区基因的特异性和亚型。三、预期结果和价值1.从三黄鸡中克隆CD4胞外区基因的全长序列，并构建原核表达载体，实现目的蛋白在大量表达和纯化。2.制备出对CD4胞外区基因有特异性的多抗，可用于检测CD4胞外区基因在机体免疫调节中的作用。3.为深入了解三黄鸡的免疫机制、筛选强免疫应答群体等提供实验依据。