cGVHD诱导小鼠肾炎模型的建立及鉴定的中期报告1.研究背景慢性移植物抗宿主病(cGVHD)是造成同种异体移植后长期存活患者死亡的主要原因之一。cGVHD患者的主要症状包括皮肤硬化、炎症、纤维化和器官损伤等，病情严重的患者往往需要接受长期的免疫抑制治疗。因此，建立动物模型并深入研究cGVHD的发病机制对于治疗该病具有重要意义。目前已经建立了多种cGVHD小鼠模型，其中包括注射全身免疫细胞、转染重组人类cGVHD相关基因等方法。肾脏是cGVHD病变的重要器官之一，肾脏病变可导致肾脏功能不全。因此，建立肾脏损伤的小鼠模型有助于进一步了解cGVHD对肾脏的影响。2.实验设计本实验选择BALB/c小鼠作为实验对象。首先，通过多轮诱导免疫小鼠，使其产生cGVHD症状。接下来，通过检测肾脏病变程度，确定是否成功建立cGVHD诱导小鼠肾炎模型。3.实验流程3.1免疫剂选择使用cGVHD小鼠模型的常见免疫剂为C57BL小鼠来源的脾淋巴细胞(PBL)。由于BALB/c小鼠与C57BL小鼠基因不同，故本实验选用与BALB/c来源接近的DBA/2小鼠的PBL进行免疫。3.2小鼠免疫3.2.1准备PBL从DBA/2小鼠脾脏中提取PBL，用红细胞淋巴细胞分离液(RBClysisbuffer,BD)清洗红细胞，然后洗涤PBL三次，用RPMI1640培养基补充10％的胎牛血清(FBS)进行细胞培养。3.2.2免疫小鼠BALB/c小鼠被分为两组，一组为实验组，另一组为对照组。实验组小鼠通过静脉注射5×10^6DBA/2小鼠的PBL，在第7、14和21天再次注射PBL，共进行三次免疫。对照组小鼠接受同等剂量的注射液(0.9％氯化钠溶液)。3.3实验组和对照组的肾脏取材和检测在免疫后的第90天，将实验组和对照组的小鼠处死并取出肾脏。分别对小鼠肾脏进行HE染色、Masson染色和免疫组化实验。HE染色：肾脏组织固定后用酒精逐渐脱水，然后在xylene中透明度处理，最后使用HE染色剂染色。Masson染色：肾脏组织制片后用酒精逐渐脱水，用5％酸性洗涤剂处理脱脂后再用冰冷水清洗。用0.1％的孟氏液钨绿染色1min，用running水洗净。然后用0.5％的甲醛水混合铬酞涂布10s,再用酒精和xylene透明度处理，最后用显微镜观察。免疫组化：采用抗体染色技术对肾脏进行检测。4.实验结果4.1免疫后BALB/c小鼠出现cGVHD症状实验组小鼠在接受PBL免疫后，开始出现cGVHD症状，包括体重下降、分泌物积聚、活动度下降和剃毛区发生炎症等。4.2HE染色结果实验组小鼠肾脏组织显示轻度炎症，细胞浸润和间质纤维化。而对照组小鼠肾脏组织正常。4.3Masson染色结果实验组小鼠肾脏组织显示轻度间质纤维化，而对照组小鼠肾脏组织未见明显病变。4.4免疫组化结果实验组小鼠肾脏组织显示TGF-β1表达升高和COL1表达增加，说明肾脏间质纤维化程度加重。5.结论本实验成功建立了cGVHD诱导小鼠肾炎模型，实验组小鼠出现了cGVHD症状，肾脏组织显示轻度炎症、细胞浸润和间质纤维化。这为深入研究cGVHD和肾脏损伤之间的关系提供了有力的实验支持。