AtMYB2转录因子与CMO基因启动子相互作用的研究的中期报告本研究旨在探究拟南芥中AtMYB2转录因子与CMO基因启动子之间的相互作用及其对亚硝酸还原酶（NRA）基因表达的影响。当前已完成实验包括以下几个方面：1.克隆CMO基因启动子序列。通过PCR扩增获得CMO基因启动子序列，长度为1.5kb，经测序验证无误。2.制备AtMYB2转录因子表达载体。将AtMYB2基因克隆到pGEX-6p-1表达载体中，成功制备AtMYB2融合蛋白表达载体。3.纯化AtMYB2融合蛋白。将AtMYB2融合蛋白表达在大肠杆菌中，并通过GST柱纯化得到含有高纯度的AtMYB2融合蛋白。4.酵母单杂交实验（Y1H）。将CMO基因启动子序列克隆到pAbAi质粒中，通过转化酵母细胞，将pAbAi-CMO与载有AtMYB2融合蛋白或GST蛋白的酵母细胞共培养。结果显示，只有含有AtMYB2融合蛋白的酵母细胞能生长在含有抗生素AureobasidinA的培养基上，表明AtMYB2与CMO基因启动子存在相互作用。5.荧光素酶报告实验（LUC）。将CMO基因启动子序列与荧光素酶基因（LUC）克隆到同一个表达载体中，构建了pCMO::LUC载体，并将其转化至拟南芥叶片中，通过荧光素酶检测发现，AtMYB2转录因子能够显著促进CMO基因启动子驱动的LUC基因的表达。6.聚合酶链反应（PCR）。以RNA为模板，用逆转录酶合成cDNA，然后利用PCR技术扩增得到NRA基因的片段。经过定量PCR，得出AtMYB2转录因子可以显著促进NRA基因表达，与LUC实验结果一致。目前实验结果初步证明，AtMYB2转录因子可以通过与CMO基因启动子的相互作用，促进CMO基因的转录，从而影响亚硝酸还原酶（NRA）基因的表达。未来还需要进一步验证和深入探究该相互作用在亚硝酸的代谢调控中的具体作用机制。