致病性大肠埃希氏菌和其检验大肠埃希氏菌,俗称大肠杆菌,是人类和动物肠道中正常菌群的主要成员,每克粪便中约含109个.大肠埃希氏菌随粪便排出后,广泛分布于自然界.水、牛乳及其他食品一旦检出大肠埃希氏菌，即意味着这些物品直接或间接被粪便污染。正常情况下，大肠埃希氏菌不致病，而且还能合成维生素B和维生素K,生产大肠菌素，对机体有利。但当机体抵抗力下降或大肠埃希氏菌侵入肠外组织或器官时，可作为条件致病菌而引起肠道外感染。有些血清型可引起肠道感染。致病性大肠埃希氏菌属主要分为五大类，首先根据发病机理分为三大类，1、产毒素型大肠埃希氏菌(ETEC)，2、侵袭型大肠埃希氏菌(EIEC)3、肠道致病性大肠埃希氏菌(EPEC)近来又提出另外两类4、出血性大肠埃希氏菌(EHEC)5、肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)致病性大肠埃希氏菌中，一般认为能产生耐热{ST)和不耐热(LT)肠毒素的两种菌株均可引起人的食物中毒。引起大肠埃希氏菌中毒的主要是一些动物性食品，如乳与乳制品、肉类、水产品等，牛和猪是传播这种病菌、引起中毒的主要原因。1996年7月在日本就发生了大肠杆菌0157型引起的食物中毒，造成9017多人中毒，10人死亡，其原因与生食萝卜苗有关，其中92例并发出血性肠炎及出血性尿毒症。2001年，再江苏、安徽等地爆发的肠出血性大肠杆菌0157:H7食物中毒，造成177人死亡，中毒人数超过2万人。如仔猪黄、白痢、猪水肿病、牛腹泻和败血症等均可由大肠杆菌引起。一、埃希氏菌属生物学特性培养特性1)需氧及兼性厌氧菌2)对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好，在15C-45℃范围内均可生长，但最适生长温度为37℃，最适pH为7.2-7.4。3)在普通琼脂平板上培养24小时，可形成圆形、凸起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大小的菌落．其菌落与沙门氏菌比较相似，但是，大肠杆菌菌落对光(45角折射)观察可见荧光。4)在肉汤培养基中生长18-24小时变为均匀浑，而后底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。5）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可见β溶血环。6）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落7）在S．S琼脂平板上多不生长，少数生长的细菌，也因发酵乳糖产酸而形成红色菌落；8）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的菌落9）在麦康凯琼脂上培养24小时后孤立菌落呈红色埃希氏菌在S．S琼脂平板上形成红色菌落在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌大肠埃希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和pH指示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变红。（麦康基琼脂，18小时，37℃）革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌大肠杆菌扫描电镜照片大肠杆菌透射电镜照片大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌平板菌落照片一、埃希氏菌属生物学特性5）、不能在氰化钾培养基上生长，靛基质试验阳性，V-P试验阴性，不利用枸橼酸盐。后四项生化特性是典型的大肠埃希氏菌，与此不一致的即为非典型大肠埃希氏菌菌。IMViC试验：如IMViC试验为+、+、-、-，且乳糖发酵，表明被检物已有粪便污染，有发生肠道传染病的危险，这是卫生细菌中常用的检测指标。（I：吲哚形成试验，M：甲基红试验，Vi：V-P试验，C：枸橼酸盐利用试验）I-吲哚（indol）试验色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚↑吲哚试剂M-甲基红（methylred）实验葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇甲基红-葡萄糖→丙酮酸甲基红+V-VP（Voges-Proskauer）试验葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→二乙酰→红色化合物+胍基化合物葡萄糖→丙酮酸××乙酰甲基甲醇C-枸橼酸盐利用（citrateutilization）试验一、埃希氏菌属生物学特性一、埃希氏菌属生物学特性LT与ST的比较一、埃希氏菌属生物学特性一、埃希氏菌属生物学特性3）K抗原是细胞外部的荚膜或菌体表面物质，又称包膜抗原。新分离的大肠埃希氏菌70％具有K抗原。根据K抗原耐热的敏感性．可把K抗原分为A、B、L三类，共有103种，致病性大肠埃希氏菌的抗原主要为B抗原，少数为L抗原，B抗原与L抗原均可在煮沸后被破坏，A抗原耐热性强，可耐受煮沸1小时而不被破坏。，O抗原可将大肠埃希氏菌分成若干血清群，再根据K抗原和H抗原进一步分为若干个血清型或亚型，根据大肠埃希氏菌抗原的鉴定结果，写出其抗原式如O111：K58(B)H12，一般认为H抗原与致病性无关，因此，一般不需要进行H抗原的鉴定。二、致病性大肠埃希氏菌的检验二、致病性大肠埃希氏菌的检验二、致病性大肠埃希氏菌的检验EMB平板照片及原理大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上的特征EMB培养基，上为E.coli，下为伤寒杆菌大肠杆菌在麦康凯琼脂（ＭａｃＣ）的特征大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂平板上的特征沙门氏菌