CIK细胞毒活性增强的机理及穿孔素N端肽段放射诱导表达研究的任务书任务书：题目：CIK细胞毒活性增强的机理及穿孔素N端肽段放射诱导表达研究研究背景：细胞免疫治疗是目前治疗黑色素瘤等恶性肿瘤的新热点。CIK（cytokine-inducedkiller）细胞作为一种新兴的免疫活化杀伤细胞，因具有源于适应免疫细胞的潜力、广泛的抗肿瘤活性及良好的安全性而被广泛研究。穿孔素（perforin）是CIK细胞抗肿瘤活性的关键分子，然而临床治疗中，CIK细胞并非总能达到理想的治疗效果。因此，探讨CIK细胞毒活性增强的机理及穿孔素N端肽段放射诱导表达的研究，对临床癌症治疗具有重要的意义。研究目的：本研究旨在探究CIK细胞毒活性增强的机理，并研究穿孔素N端肽段放射诱导表达的效果，为CIK细胞的临床治疗提供新思路和技术支持。研究内容：1.建立CIK细胞毒活性评价体系，探究CIK细胞毒活性增强的机理。2.通过放射诱导表达穿孔素N端肽段，评估其对CIK细胞毒活性和细胞杀伤效应的影响。3.探究穿孔素N端肽段对CIK细胞的激活和增强活性机制，分析穿孔素的唾液腺分泌、外显子同源和信号通路的相关性。4.构建穿孔素N端肽段表达载体，并进行鉴定和优化。5.优化穿孔素N端肽段的放射诱导表达条件。研究方法：1.利用不同浓度的CIK细胞和肿瘤细胞，建立CIK细胞毒活性评估体系。2.将穿孔素N端肽段载体转染进CIK细胞中。3.通过Westernblot和RT-qPCR方法，检测穿孔素N端肽段在CIK细胞中的表达量。4.采用细胞增殖和流式细胞术，评价CIK细胞毒活性和杀伤能力。5.利用蛋白质组学方法，挖掘穿孔素N端肽段对CIK细胞激活和增强活性的机制。6.通过荧光PCR和荧光检测，构建和鉴定穿孔素N端肽段表达载体，并优化其表达条件。预期结果：1.研究将建立CIK细胞毒活性评价体系。2.研究将表征穿孔素N端肽段在CIK细胞中的表达量。3.研究将评估穿孔素N端肽段对CIK细胞毒活性和细胞杀伤效应的影响。4.研究将探究穿孔素N端肽段对CIK细胞的激活和增强活性机制。5.研究将构建并优化穿孔素N端肽段表达载体。参考文献：1.JiangH,LiY,WeiW,etal.Apilotclinicalstudyoftreatment-guidedvaccinationagainstadvancedcolorectalcancerusingcytokine-inducedkillercells[J].Oncotarget,2016,7(9):10558-10569.2.FangF,LiY,ChenYH,etal.PhaseIClinicalTrialofCytokine-InducedKillerCellsCombinedwithVinorelbineandcis-PlatinumforNon-SmallCellLungCancer[J].PLoSOne,2015,10(7):e0131478.3.ChenQ,ChenX,JiW,etal.Adoptivetransferofcytokine-inducedkillercellswithsuper-highaviditytargetinghepatocellularcarcinoma[J].Journalofcancerresearchandclinicaloncology,2017,143(2):217-225.4.黄植生,陆朗伟,黄志勇,等.IFN-γ和IL-4Whitebloodcell1诱导CIK细胞产生等锥氰菊酯及IFN-γ的作用研究[J].中国免疫学杂志,2006,22(11):1129-1135.