请教：请教：蛋白浓缩方法请教各位高手，我想将细胞培养上清中的蛋白浓缩10倍，但要确保最小的蛋白变性与蛋白丢失，应该采用什么方法比较好？请不吝赐教，谢谢！可以用：超虑；盐析；过离子柱等等，看你的试验条件定咯蛋白浓缩方法基本有：丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法……1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。2，免疫沉淀法：得有特异性抗体！3，硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析）选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济！4，（低温）有机溶剂沉淀法：强调低温（0-4度以下）是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性，可用乙醇，丙酮……注意：Mg2+离子，pH值5，聚乙二醇沉淀法：使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性！他溶解是散热低，形成沉淀的平衡时间短，通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀！6，超滤法：主要针对小体积蛋白质溶液（几ml）此法更不易引起变性！不过得有浓缩器，不是哪个实验室都有的！7，透析法：主要用于更换蛋白质的缓冲液！的有透析袋！不需要特殊的仪器！8，离子交换层析：可用阴离子交换树脂进行浓缩！9，冷冻干燥法：在冷冻状态下让扬品种的液体升华具体你的实验应该是做一种分泌蛋白吧？浓缩后要干什么，需要活性蛋白么？实验室设备如何，导师经费如何？这些都要考虑！！我用的是硫酸铵沉淀法，物廉价美。用4度饱和硫酸铵等体积加入收集的上清中，以30000g的速度离心30分钟，弃上清，加入你所需体积的缓冲液体，在震荡器上使沉淀溶解，再在10000g下离心10分钟取上清分装保存于-80度即可关于蛋白浓缩，我认为最好的方法是真空冷冻干燥法，此法简便，蛋白质几乎无变性。lhydywrote:请教各位高手，我想将细胞培养上清中的蛋白浓缩10倍，但要确保最小的蛋白变性与蛋白丢失，应该采用什么方法比较好？请不吝赐教，谢谢！不知你何种用途，最简单的浓缩我们常用蔗糖或PEG包埋。一个简便的方法你可以试试：找一透析袋，底部扎紧，袋口扎一去底的塑料或玻璃试管，将待浓缩的液体从管口灌入透析袋中，将整个装置挂在冰箱中，或者用电风扇吹，液体干后可再继续加入，直至样品浓缩至所需体积。如必要，可事先将待浓缩液用蒸馏水或去离子水透析以去盐分，然后再按上述方法浓缩，这样可以避免浓缩后盐份过高。此法简便易行，我们实验室常用此法浓缩。浓缩后的液体可以用吸管从试管口吸出，而且透析袋只要不破裂，可以反复使用。可以用millipore公司的amiconultra－15cenfilterunitetrifugalunits。每个30多元，但是效果非常好。只需要将培养上清加入，然后高速离心后即可直接得到无菌的浓缩液。对于新的透析袋有化学杂质，需要处理，为了去除这些杂质，通常我们用10mmol/L的碳酸氢钠，1mmol/L的EDTA溶液煮沸30min，之后用双蒸水充分冲洗，之后放在EDTA溶液4度保存！防止微生物污染！！lrmoon介绍的方法听起来很好，能否具体介绍一下，谢谢！Millipore'sproductsareeasytouse,butitintendstobeblockedifyouareusingrawcellextractsorsupernatantofculturemediaespeciallyyouwanttocollectsmallMWproteins.IonceusedaMWcuting3000's,butIcanonlyconcentratemysamples2-3timesbeforeitwastotallyblocked.Basicly,itisacentrifugetubewithamembrane,alittlebitlikePCRpurificationkits,exceptproteinisnotbindingwiththemembrane.Theuseofmembraneistoseparatetheresiduemolecularfromthefiltratemolecularbymolecularweight.YoucanchoosedifferentmemberanebytheMWcutting(from3000to100000)henceconcentrateyourtargetcompoundsinthesample.Itcanalsobeusedtodesaltandsoon.thanks!!冷冻干燥或peg20000都可以amiconultra－15c