刘苹冰冻切片和石蜡切片时组织组化学中最常用的制片方法。石蜡切片是观察组织细胞结构的理想方法，可用于陈旧石蜡包埋材料的研究，切片薄，有连续性，蜡块可长期保存，但是抗原的保存量不如冰冻切片。冰冻切片制片方法简单，可避免石蜡切片因固定、脱水、浸蜡等步骤造成的抗原损失。迅速冷冻可防止冰晶的形成，避免组织细胞结构的破坏。制片方法的种类:非切片法,切片法制片的一般步骤:1.切片法:取材和固定;洗涤;脱水;透明;透入;包埋;切片;贴片;染色;封藏2.非切片法整体封藏法,涂片法,压碎法石蜡切片技术一.取材固定冲洗脱水脱水时应注意：(1)每向后转移前，须先将组织块上的液体用吸水纸吸干，以免影响后续乙醇的浓度;（2）在高浓度或无水乙醇中，每级停留的时间不宜太长，否则可使组织收缩变脆，影响切片；（3）如需过夜，应停留在70%乙醇中，也可长期保存，可防止因时间倒不开而影响后续步骤。透明如果组织进入二甲苯30min以后还不变色，或中心有白色，说明水分未脱净，应返回无水乙醇继续脱水。透明这一步至关重要，若透明时间不足，则石蜡进不去，不能切片；若透明时间过长，则使组织收缩变脆、变硬，切片易碎。这一步要靠经验。浸蜡包埋石蜡切片操作：（1）固定切片刀：刀刃向上，保持水平。调好角度，一般在4-6度。（2）固定组织块。（3）调整所需要的切片厚度：一般在6-10微米。（4）移动持刀器，或拔开齿轮上的牵引钩，前后转动齿轮以移动组织块固定器，调节组织块表面和刀刃的距离，以刚要接近时为止。（5）调整组织块与刀刃之间的角度和位置：组织块的切面及上下边须与刀刃平行。（6）粗切：右手摇轮，左手转动齿轮，慢慢将组织块切到组织本身。（7）切片：右手转动摇轮，转一圈可切下一片，切第二片与第一片连在一起，即成连续切片。左手用镊子或毛笔提起切片的下端，轻轻向自身方向拽，使切片成连续的带状。（8）展片：停止切片，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带跳起，靠刀刃的一面向下，慢慢接触40-45℃的水面，借助水的表面张力使其在水面展开。如有小的皱褶，用小镊子轻轻分开。应注意：水温过高，易使切片全部融化；水温过低，切片不宜伸展。（9）贴片：即将切片贴在载玻片上。先将连续切片分成一片或小段。将载玻片1/2处均匀涂一层薄薄的蛋白甘油（等量的鸡蛋清和甘油混合而成，防止脱片。），将载玻片垂直插入水中，以涂有蛋白甘油的面贴近组织片，提起载玻片使组织片贴附在载玻片上。用小镊子将切片摆在载玻片1/3和2/3的交界处，并摆正位置。然后在52-60℃恒温箱烤干。冰冻切片冷冻切片操作：1.冷冻切片机要始终处于运行状态，即使在不做冷冻切片时也要开着致冷，不能时开时关，以免影响机器寿命。2.手术取下的新鲜组织不要固定，因固定过的组织不利于切片，而且还会影响染色。3.用OCT做包埋剂，起到支撑的作用。先将OCT标在固定头上再将组织放在OCT上，OCT不要太多，以免流到固定头外，组织表面露在OCT外。4.固定头放在冷冻机内的速冷台上，在-25℃左右，冻10min，视组织不同而时间略有差异，组织较大或脂肪组织时间可长一些，一般情况下10min左右即可。如果冷冻不足，则切片可呈粥糜状或切不下来；如果冷冻过分，则切片呈碎悄状或切片上呈条痕状，都得不到良好的切片。5.高速刀的角度，固定好，切片刀要快。6.把冻好的冻头夹到切片机上，用精调修平组织，使其暴露最大切面，将微调刻度调在5μm，放下抗卷板开始切片，得到满意切片后，打开抗卷板，将组织贴在载玻片上。载玻片要放平。动作要稳，一次完成，这样才能将切片完整的贴在载玻片上。7.切片晾干后用95％乙醇固定10s，水洗后进行常规染色。8.冷冻切片完成后取下冻头组织，固定后做常规切片。将冷冻机内的组织碎屑清扫干净，定期打开紫外线消毒。