农残分析_可见紫外分光光度法一、分光光度法的基本概念（二）光的微粒性——普朗克公式光作为辐射能又具有微粒性的特征。所谓微粒性，即指光是由光量子（或光子）的一种粒子组成。光辐射的能量是一份一份的。单个光量子的能量与波长的关系可用普朗克（plank）公式表示式中：E——能量；h——普朗克常量从公式可见，光量子的波长与其能量成反比，波长愈长，能量愈小。（三）可见紫外、红外光区的划分根据电磁波具有波粒二重性的特点，可把自然界存在的各种电磁波按波长顺序排列成谱，称为电磁波谱，如表6－1所示。可将电磁波波长划分为若干波段区域各波段能量不同，引起物质运动的形式亦不同。物质吸收紫外光和可见光则引起分子中价电子的跃迁；物质吸收红外光则引起分子振动，因此可见紫外光谱又称为电子光谱，红外光谱又称为分子振动光谱。本章讨论可见及紫外分光光度法，由于可见紫外吸收光谱是由电子跃迁产生的，因此波长为100－800nm的光线才有足够的能量引起电子跃迁。分为三个区域:100－200nm远紫外区200－400nm近紫外区400－800nm可见光区域。二、可见紫外分光光度计（一）光源在可见紫外分光光度计上常用的光源是钨丝灯和氢弧灯(或氘灯)可见光区用钨丝白炽灯，其波长在320－2500nm之间。紫外光区用氢弧灯或氘灯，其波长在180－375nm。用氢灯或氘灯作为光源，灯管上必须装有石英窗（因玻璃对紫外光有吸收）。（二）单色器单色器是指能将不同波长的入射光分散为单色光的装置，主要由透镜（聚焦作用）、输入输出狭缝（阻挡不需要的光）和散射装置（把白色光散成不同波长的光，是一种分辨器）组成。散射器是单色器的核心，由棱镜或衍射光栅组成。玻璃棱镜只能用于可见光区；石英棱镜或反射光栅可用于紫外、可见及近红外光区。棱镜的色散原理：不同波长的光在玻璃或石英中的折射率不同，波长短的光折射率大，波长长的光折射率小，当平行的混合光经过棱镜后，就会使不同波长的光按次序偏折分开，而成光谱。其光波由紫外线到长波方向越来越密。光栅的色散原理：光栅是在石英或玻璃表面上刻划许多等距离的平行线，大约每2.45cm刻15000－30000条线。刻线处不透光，光只能在两条刻线中间的平面处透过去。这些平面形成极微小的缝，光透过小缝时即产生绕射现象。较长的光波偏折的角度大，较短的光波偏折角度小。从棱镜或光栅射出的光经旋转反射镜就可依次射出狭缝，经聚焦后达到吸收池。现代高级分光光度计往往采用双单色器，即包含两个光栅或两个棱镜，或一个棱镜一个光栅，这样可以减少杂散光，提高仪器的分辨能力。（三）吸收池吸收池是用以盛装样品溶液进行测定的容器。可见光区用玻璃吸收池；紫外区需用石英吸收池。池厚（内径）有0.5，1，2cm等几种，一般使用1cm的，吸收池的光洁度对测定影响很大，透明光学面不得用手指拿，不得用毛刷等硬物擦洗，通常用擦镜纸擦洗。测定时如遇挥发性液体或气体，需盖上池盖，以免溶液挥发影响测定浓度或产生气体损害仪器部件。（四）检测器检测器的功能是检测光信号并将其转变为电信号。检测器主要部件为光电池或光电倍增管等。光电倍增管是当前应用最多的一种检测器，它的作用是利用二次电子发射以放大光电流，放大倍数可达108倍。对检测器的要求是灵敏度高、对辐射响应时间短、对辐射能量响应的线性关系良好、噪音小、性能稳定等。（五）测量信号指示系统用光电倍增管作检测器，需要将检测器信号放大以后用记录器记录下来，不同型号分光光度计记录装置不同，目前许多由微处理机控制的紫外可见分光光度计，可自动调零，自动筛选波长，自动设置参数、扫描与计算均自动完成，大大减少了人为误差。三、分光光度法的基本定律比尔定律基本公式如下：式中：A——吸光度（absorbence）T——透光度（transmittance）或称透射率；I0——入射光强度；I——透过强度；L——光程长度即样品溶液的厚度（通常为吸收池的厚度）；C——样品溶液的浓度；K——。此公式一般适合于稀溶液，也可用于气体或固体。在具体应用时，被测溶液浓度可用mol/L或百分浓度来表示。用mol/L来表示时，用L为1cm比色池，相应的吸光系数称为摩尔吸光系数（molarabsorptivity）用符号ε表示用百分浓度g/100ml来表示时，L为1cm比色池，相应吸光系数称为百分吸光系数，用符号表示。E与ε的关系如下：式中：m——物质的分子量测定ε值得意义(1)根据ε值的大小，可以确定化合物吸光度的强弱，ε值＞104为强吸收，ε＝103－104为较强吸收，ε＝102－103为较弱吸收，ε＜102为弱吸收。(2)ε值大小与电子跃迁种类及电子在两个能级间跃迁的几率有关，如不