杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园西园八路2号H座2601邮编：310030电话：0571-56011203传真：0571-87983751动物组织DNA试剂盒说明书产品组成动物组织DNA试剂盒50次制备Cat.No.3101050核酸纯化柱50个2ml离心管50个蛋白酶K24mg蛋白酶K溶解液1.2mlBufferAT15mlBufferSL12mlBufferWA（浓缩液）12mlBufferWB（浓缩液）9.5mlBufferTE12ml说明书1份产品储存与有效期1.蛋白酶K中加入蛋白酶K溶解液后请于-20℃贮存。2.其他试剂与物品如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品贮存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail:technical@simgen.cn,电话：400-0099-857。产品介绍本产品适合从≤25mg（脾脏≤10mg）新鲜的或者是冷冻贮藏的人或动物组织中分离纯化总DNA（包括基因组DNA、线粒体DNA及可能存在的病毒DNA）。被溶解的动物组织经蛋白酶K消化后DNA将结合到纯化柱上，降解的蛋白与PCR抑制物则被过滤除去，DNA经BufferWA和BufferWB洗涤后，用BufferTE洗脱，即可用于各种分子生物学实验。用户需自备的试剂与物品1．无水乙醇2．1.5ml离心管3．移液器及吸头4．一次性手套及防护用品和纸巾5．台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子）6．水浴锅和旋涡振荡器使用前准备1）如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。2）将水浴锅温度设置到56℃和70℃，将BufferAT和BufferTE温育至56℃。3）根据试剂瓶标签上的指示在BufferWA和BufferWB中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。4）将蛋白酶K溶解液全部加入到蛋白酶K中，混合均匀配制成蛋白酶K贮存液，-20℃贮存。www.simgen.cn仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。Ver.1杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园西园八路2号H座2601邮编：310030电话：0571-56011203传真：0571-87983751操作步骤：1.用手术刀切取≤25mg人或动物组织（脾脏少于10mg），再用刀尖将组织剁成匀浆状，转移组织到一个1.5ml离心管中。*必须将组织颗粒剁成匀浆状，方能缩短组织的溶解时间。*勿使用超过25mg的组织，否则将超出蛋白酶K的消化能力，导致纯化柱堵塞等问题。*如果所提取的组织中含结缔组织较多，比如皮肤、肌腱等，则应用手术刀刀尖将组织切成尽量小的碎屑。*上述步骤也可用组织匀浆器进行匀浆，然后将经BufferAT悬浮的组织匀浆液转移到一个1.5ml离心管中。如果溶液体积不足200µl，则应补加BufferAT使匀浆液总体积至200µl，再加入20µl蛋白酶K贮存液，进入步骤3的操作。2.加入20µl蛋白酶K贮存液。加入180µl56℃预热的BufferAT，漩涡振荡数秒使组织匀浆分散开来。3.56°C水浴10分钟，期间漩涡振荡数次帮助组织溶解。*如果10分钟水浴后发现仍有不可溶解的组织颗粒存在，可延长水浴时间直至组织全部溶解。*对于皮肤，肌腱等难以溶解的组织，可将离心管放入恒温混匀器或摇床中56°C，900rpm温育直至组织彻底溶解。4.加入200µlBufferSL，旋涡振荡约15秒混匀。将离心管置于70°C水浴10分钟。*如果从非常新鲜的组织中提取DNA，可能会同时获得部分RNA，但是RNA的存在并不影响PCR相关的实验，如需去除RNA，请在本步骤中添加5µlRNaseA储存液（浓度为100mg/ml，本试剂盒不提供）。5.加入200µl无水乙醇，温和地翻转4~6次混合均匀。低速离心数秒使管盖上的溶液沉降到管底。6.吸取步骤5中的溶液加入到核酸纯化柱（纯化柱置于2ml离心管中）中，盖上管盖，12000rpm离心30秒。*注意不要将溶液沾到纯化柱管口的边缘上，以免后续的洗涤步骤不能洗净纯化柱。7.弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入500µlBufferWA,盖上管盖，12000rpm离心30秒。*确认在BufferWA中已经加入无水乙醇。*滤液无须彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染，可将2ml离心管在纸巾上倒扣拍击一次。8.弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2